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第五讲 抗炎作用实验研究思路与方法 上海中医药大学药理教研室 高建平 •炎症反应是临床常见病理生理过程，感染、缺血、抗原-抗体反应、化学、热或机械损伤等均 可诱发炎症反应。 •中药中具有明确抗炎作用的药物类别有： •解表药，清热药，祛风湿药，泻下药，温里药，活血化瘀药，化痰止咳平喘药，开窍药等 实验动物的选择 •哺乳动物，雄性。 •足趾肿胀法用大鼠。 •过敏性炎症首选豚鼠。 常用抗炎实验方法 •根据致炎性质的不同分为两大类： （一）非特异性炎症模型： •致炎因子主要有：异性蛋白（如鸡蛋清）、颗粒性异物（如角叉菜胶*、棉球、酵母）、化学物 质（二甲苯、松节油、甲醛） （二）免疫性炎症模型： •细胞介导的超敏反应性炎症，免疫复合物介导的炎症反应模型。 （一）非特异性炎症模型 •非特异性炎症反应有三期： •早期（急性）炎症时相，以局部血管扩张和毛细血管通透性增加为特征； •中期（亚急性）时相，以血小板粘附、白细胞和吞噬细胞的浸润为特征； •炎症晚期（慢性增殖期）以纤维组织增生、纤维化和肉芽屏障形成为特征。 • 急性和亚急性炎症的实验方法： 1、毛细血管通透性测定： •评价药物对炎症物质引起的血管通透性增加的抑制作用。 【原理】常用染料渗出法，如伊文思蓝与血浆蛋白稳固结合，当致炎因子（醋酸，组织胺，5- 羟色胺，PG 等）诱导毛细血管通透性升高时，在一定范围内染料的漏出量可反应渗出毛细血管 的血浆蛋白量。 【方法一】 •取雄性大鼠或小鼠，随机分组，给予受试药物、阳性药物或生理盐水。 •30min 后，在已剃毛的背部两个被位分别皮内注射组胺和5-羟色胺，立即静脉注射1%伊文思 蓝溶液。 •15min 后，处死动物，剥离背部皮肤，测量注射部位着色面积，或者剪下着色皮肤，切碎，在 水-丙酮溶液中浸泡24-48h，过滤，分光光度计比色。 [评价] 本法操作简单，但操作时应注意：伊文斯兰注入量一定要准确，滴二甲苯浸润皮肤要仔细。 皮肤毛细血管通透性增高是抗炎作用研究的最常用的模型之一。操作简单，重现性较好。实验 结果直观。 【方法二】 •取小鼠随机分组，给药1-2 小时后，各鼠静脉注射0.5%伊文斯兰生理盐水溶液0.1 ml/10g，随 即腹腔注射0.6% HAC 0.2ml/只，20min 后处死动物，打开腹腔，用生理盐水分次冲洗腹腔，合 并洗涤液离心，取上清液590nm 处比色测定，计算腹腔染料量，评价毛细血管通透性。 2、炎性肿胀的测定 （1）小鼠耳廓肿胀法：耳廓涂抹致炎剂 •致炎剂：二甲苯，巴豆油合剂。 （2 ）大鼠足趾肿胀法：足趾皮下注射致炎剂 •致炎剂：鸡蛋清，角叉菜胶，酵母，甲醛，右旋糖酐，酵母液，组胺，5-羟色胺，制霉菌素 •检测指标 •大鼠足趾肿胀法，测定大鼠足趾或关节的周长、厚度或整个足趾、踝关节的容积。 •小鼠耳廓肿胀法，测定小鼠耳廓重量或者厚度。 【评价】 足肿胀模型：最常用，多种化学、物理以及免疫学刺激，因水肿发展和消退的快慢及持续 时间不同，可将其分为急性、亚急性和慢性，急性一般于给致炎剂数十分钟或1-3h 炎症迅速发 展至高峰，数小时内会消退。 慢性足肿胀于数至十日以上发展逐渐达高峰，亚急性介于中间。 炎症慢性增殖期模型 •肉芽肿模型： •应用巴豆油、脱脂棉、海绵、玻璃棒、塑料环、纸片等埋入动物局部皮下，可引起与临床某些 炎症后期病理变化相似的肉芽增生，然后观察药物对肉芽重量的影响。 常用方法：塑料环法；大鼠巴豆油气囊法；棉球植入法；琼脂皮下注射法等。 （二）免疫性炎症模型 •在各种风湿性疾病病理过程中起着主导作用。 •细胞介导：抗原进入机体使T 细胞致敏，当再次接触抗原，致敏T 细胞分化增殖，释放各种 淋巴因子以及直接杀伤靶细胞，引起单核细胞浸润为主的局部炎症反应。 •免疫复合物介导：系由抗原抗体形成复合物，激活补体，导致白细胞趋化激活，释放一系列 致炎因子产生局部和全身炎症反应。 1、大鼠佐剂性关节炎 •常作为类风湿性关节炎的一种实验模型。 •将弗氏完全佐剂皮内注入大鼠足趾部或尾根部致炎。 •原发病变类似于一般炎性水肿，在致炎部位12h 后出现肿胀。继发病变由迟发性超敏反应引起， 在致炎10d 左右后出现对侧、前肢足爪肿胀，耳、尾、出现炎症结节和红斑等。 【评价】 •本方法特异性高，假阳性率低，结果可靠。比其他模型更接近于临床类风湿性关节炎（RA ）。 •弗氏完全佐剂的制备是模型成败的关键。（液体石蜡：羊毛脂（2:1 ）共热至 70