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第五节 酶类药物的生产 一、药用酶的分类及应用 二、药用酶制备方法 三、药用酶的常用提取纯化方法 四、药用酶生产实例 五、药用酶的研究热点 一、药用酶的分类及应用 (一)、药用酶的概念 用于预防、治疗和诊断疾病的一类酶制剂称为药用酶。 (二) 药用酶的分类 1. 消化酶类 作用：水解和消化食物中的成分，用于治疗消化紊乱或促进消化。 　如：胃蛋白酶、多酶片（蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、纤维素酶）。 2、消炎酶类 作用：用于外伤、手术后、关节炎、副鼻窦炎等伴有水肿的炎症，能抑灭细菌，促进渗出液再吸收，达到消炎的目的。 　如：蛋白酶（菠萝蛋白酶、木瓜蛋白酶、胶原酶、胰蛋白酶）；多糖水解酶（溶菌酶、葡聚糖酶）；核酸酶；超氧化物歧化酶等。 (二) 药用酶的分类 3. 与治疗心脑血管疾病有关的酶类 作用： 血液中存在着相互拮抗的凝血系统和抗凝血系统（纤维蛋白溶解系统）。 如：链激酶、尿激酶和纤溶酶（临床上用于治疗血栓）。 4. 抗肿瘤的酶类 如：天冬酰胺酶（抗恶性肿瘤、抗白血病）、神经氨酸苷酶（肿瘤免疫治疗剂）。 (二) 药用酶的分类 5. 其他药用酶 解毒：有机磷解毒酶（用于治疗有机磷农药中毒，缓解中毒症状） 　青霉素酶（能分解青霉素，用于治疗青霉素引起的过敏反应） 抗衰老、抗辐射：超氧化物歧化酶（清除体内氧自由基） 　细胞色素C（是参与呼吸链的一种非常有效的电子传递体，是组织缺氧治疗的急救和辅助用药） 降血压、降血脂：弹性蛋白酶 防踽齿：葡聚糖酶 二、药用酶制备方法 (一) 酶的来源： 动物 植物 微生物 二、药用酶制备方法 (二) 药用酶制备方法 1. 直接提取法 工艺包括：选材→预处理→提取→分离→纯化。 关键：选择含量丰富的动植物原材料 重点：工艺简便、稳定、成本低、无污染、收率和酶比活力高、适于大规模生产的提取纯化方法。 2. 微生物发酵法 工艺包括：菌种培养→种子培养→发酵→发酵液处理 关键：选育高产菌株 高产菌株的选育途径：①自然界筛选，②诱变育种，③基因工程和细胞工程。 生产方法：液体深层发酵 提高药用酶产量的措施 3. 动植物细胞培养法 如：大蒜细胞进行培养来生产超氧化物歧化酶（SOD），利用木瓜细胞生产木瓜凝乳蛋白酶 三、药用酶的常用提取纯化方法 1. 水溶液法 ①盐浓度：稀盐溶液或缓冲液；一般使用等渗盐溶液，如0.002～0.005mol/L磷酸盐缓冲溶液或0.15mol/L氯化钠溶液。 ②温度：低温下操作； ③pH：选择偏离等电点的适当pH值。 三、药用酶的常用提取纯化方法 2. 有机溶剂法 【针对与脂类结合的酶，注意不可引起变性】 常用的有机溶剂：丁醇 方法：①均相法；②二相法。 3. 表面活性剂法 　【一种解构蛋白质结合力的方法】 纯化方法参见蛋白质的纯化。 三、药用酶的常用提取纯化方法 4. 其他　 利用溶解度、分子结构和大小、电离性质、生物功能专一性（亲合性）不同的纯化方法——盐析、凝胶层析、亲和层析、超速离心等。 四、药用酶生产实例——ＳＯＤ 五、药用酶的研究热点 (一) 、酶分子改造 1. 药用酶的不足之处： 活力不高 稳定性较差：蛋白水解酶、抑制剂 有抗原性 体内半衰期短 2. 改造方法：酶分子修饰技术 通过各种方法使酶分子结构发生某些改变，从而改变酶的某些特性和功能的过程 3. 酶分子修饰技术 金属离子置换修饰 用于酶分子修的金属离子是二价金属离子 大分子结合修饰 常用的修饰剂：右旋糖酐、聚乙二醇、肝素、蔗糖聚合物、聚氨基酸 肽链有限水解修饰 专一性较强的蛋白酶或肽酶 3. 酶分子修饰技术 酶蛋白侧链基团修饰 侧链基团 氨基、羧基、巯基、咪唑基、吲哚基、酚羟基、羟基、胍基、甲硫基 修饰剂 氨基修饰剂、羧基修饰剂、胍基修饰剂、巯基修饰剂、酚基修饰剂、分子内交联剂 五、药用酶的研究热点 3. 酶分子修饰技术 氨基酸置换修饰 物理修饰 副键发生某些变化和重排 (二) 基因工程药用酶的开发 * * 用于酶发酵生产的细胞必须具备的条件 产量高 易培养和管理 稳定性好 利于酶的分离纯化 安全可靠 常用的产酶微生物 枯草芽孢杆菌 大肠杆菌 黑曲霉 米曲霉 青霉 木霉 根霉 毛霉 链霉菌 啤酒酵母 假丝酵母 植物细胞 添加诱导物 酶的作用底物 反应产物 底物类似物 控制阻遏物的浓度 阻遏物： 酶催化反应产物 分解代谢物 采用较难利用的碳源、补料、分次流加碳源、添加环腺苷酸 代谢途径的末端产物 添加末端产物类似物 添加表面活性剂 非离子型表面活性剂 添加刺激剂 真菌细胞壁碎片或有效成分、微生物胞外酶、小分子物质 添加产酶促进剂 新鲜血液 红细胞 离