备战2020年高考生物考点一遍过考点80PCR技术(含解析).doc

考点 80 PCR技术 1． PCR原理 （ 1）细胞内 DNA复制条件 条件 组分 作用 模板 DNA的两条单链 提供复制的模板 原料 四种脱氧核苷酸 合成 DNA子链的原料 解旋酶 打开 DNA双螺旋 酶 DNA聚合酶 催化合成 DNA子链 能量 ATP 为解螺旋和合成子链供能 引物 RNA 为 DNA聚合酶提供合成的 3’端起点 （ 2）细胞内 DNA复制过程 ①DNA的两条链是反向平行的，通常将 DNA的羟基末端称为 3’端，而磷酸基团的 末端称为 5’端。 DNA聚合酶不能从头开始合成 DNA，而只能从 3’端延伸 DNA 链，因此， DNA复制需要引物。 DNA的合成方向总是从子链的 5’端向 3’端延伸。 ②在 DNA的复制过程中，复制的前提是双链解开。在体外可通过控制温度来实现。 80~100 ℃的温度范围内， DNA的双螺旋结构将解体，双链分开，这个过程称为变性。 PCR利用了 DNA的热变性原理， 通过控制温度来控制双链的解聚与结合。由于 PCR过程的温度高， 导致 DNA聚合酶失活， 后来耐高温的 DNA聚合酶的发现和应用，大大增加了 PCR的效率。 ③PCR反应需要在一定的缓冲溶液中进行，需提供： DNA模板，分别与两条模板链 相结合的两种引物， 四种脱氧核苷酸， 耐热的 DNA聚合酶， 同时通过控制温度使 DNA复制在体外反复进行。 2． PCR的反应过程 PCR 一般要经历三十多次循环，每次循环可以分为变性、复性和延伸三步。从第二轮循 1 环开始，上一次循环的产物也作为模板参与反应，并且由引物Ⅰ延伸而成的 DNA单链会 与引物Ⅱ结合，进行 DNA的延伸，这样， DNA聚合酶只能特异地复制处于两个引物之间 的 DNA序列，使这段固定长度的序列成指数扩增。 3．实验操作 1） PCR反应体系：缓冲液、 DNA模板，四种脱氧核苷酸原料、热稳定的DNA聚合酶、两种 RNA引物、水。 2）实验操作步骤 ①按照 PCR反应体系配方配制反应液； ②将 PCR反应体系 50μ L 用微量移液器转移到微量离心管（ 0.5 mL ）中； ③将微量离心管放到 PCR仪中； ④设置 PCR仪的工作参数； ⑤DNA在 PCR仪中大量扩增。 考向 PCR 的反应过程 1．聚合酶链式反应 (PCR)是一种体外迅速扩增 DNA片段的技术。 PCR过程一般经历下述 30 多次循环：95 ℃下使模板 DNA变性、解链→ 55 ℃下复性 ( 引物与 DNA模板链结合 ) →72 ℃ 下引物链延伸 ( 形成新的脱氧核苷酸链 ) 。下列有关 PCR过程的叙述中不正确的是A．变性过程中破坏的是 DNA分子内碱基对之间的氢键，也可利用解旋酶实现 B．复性过程中引物与 DNA模板链的结合是依靠碱基互补配对原则完成的 C．延伸过程中需要 DNA聚合酶、 ATP、四种核糖核苷酸 D． PCR与细胞内 DNA复制相比所需酶的最适温度较高 【参考答案】 C 【试题解析】 变性过程中破坏的是 DNA分子内碱基对之间的氢键， 解旋酶也具有该作用， 2 A 正确。复性过程中引物与 DNA模板链的结合是依靠碱基互补配对原则完成的， B 正确。 延伸是合成 DNA的过程，所以该过程中需要 DNA聚合酶、 ATP、四种脱氧核糖核苷酸， C 错误。 PCR与细胞内 DNA复制相比所需酶的最适温度较高，因为 PCR过程需要高温变性， 即使在复性时的温度也比较高， D 正确。 2．利用 PCR技术扩增目的基因，其原理与细胞内 DNA复制类似（如下图所示）。图中引物为单链 DNA片段，它是子链合成延伸的基础。下列叙述错误的是 A．用 PCR方法扩增目的基因时不必知道基因的全部序列 B．设计引物时需要避免引物之间形成碱基互补配对而造成引物自连 C．退火温度过高可能导致 PCR反应得不到任何扩增产物 D．第四轮循环产物中同时含有引物 A 和引物 B 的 DNA片段所占的比例为 15/16 【答案】 D 3 1．PCR(多聚酶链式反应 ) 技术是一项在生物体外复制特定的 DNA片段的核酸合成技术， 如图 表示合成过程。下列说法错误的是 A．甲过程高温使 DNA变性解旋，该过程不需要解旋酶的作用 B．丙过程用到的酶在高温下失活，因此在 PCR扩增时需要再添加 C．如果把模板 DNA的两条链用 15N 标记，游离的脱氧核苷酸不做标记，循环 3 次后，在 形成的子代 DNA 中含有 15 N标记的 DNA占 25% D． PCR中由碱基错配引起的变异属于基因突变 2．下列有关 PCR技术中引物的叙述，正确的是 A．引物是一小段 DNA分子或双链 RNA分子 B．扩增一个 DNA分子至少需要的引物数目等于新合成的 DNA子链数目 C．两种引物之间能够发生碱基互补配