实验一 氨基酸薄层层析剖析.pptVIP

生物化学实验 温州医学院生物化学教研室 毛孙忠 7A211 氨 基 酸 薄 层 层 析 Thin Layer Chromatography Of Amino Acid 层 析 层析原理 待分离物质（流动相）经过一个固态物质（固 定相）时，根据溶液中待分离物质各组分颗粒 大小、电荷多少及亲和力等，使待分离物质中 各组分在两相中反复分配，并以不同速度流经 固定相而达到分离混合物的目的 。 层析概念 层析为实验室一类分离技术的总称。 层 析 分 类 按流动相 气相层析 液相层析 按固定相形状 柱层析 薄层层析 纸层析 层 析 分 类 类别 分离原理 基质或载体 吸附层析 化学、物理吸附 硅胶、氧化铝 、羟基磷酸 分配层析 两溶剂相中的溶解效应 纤维素、硅藻土 、硅胶 凝胶过滤 分子筛效应的排阻效应 琼脂糖、葡聚糖 离子交换层析 离子基团的交换反应 离子交换树脂 、纤维素、 葡聚糖 亲和层析 分离物与配体之间有 带配基的琼脂糖 特殊亲和力 或葡聚糖 原 理 薄层层析由一平铺固定于玻璃板或塑料板的固定相 及一由有机溶剂构成的流动相组成。样品点在固定 相，由于样品中不同的成分被固定相吸附剂吸附的 牢固程度不同及在有机溶剂中溶解性质不同，当有 机溶剂因为毛细管作用沿吸附剂上升时，不同的成 分而被分开。当与一标准物同时层析时，可鉴定未 知样品中的不同成分。 操 作 ? 制板 ? 点样 ? 展层 ? 染色 ? R f (Retention factor) 计算 1. 点 样 2cm 铅笔划线 ( 小、均匀 ) 2. 展 层 : 30 ° ① 30 ° ②板要端正 ③划线端朝上 / 下 ? 先吹干 3. 染 色 : 标记溶剂前沿 吹干 喷茚三酮 吹干 4. 测量并计算 R f = AA 斑点中心到底线距离 溶剂前沿到底线距离 Arginine Leucine Alanine Mixture 前 沿 三种氨基酸 R f 的计算 实验室规则 １、自觉遵守学习纪律，保持实验室肃静，不得 喧哗吵闹、迟到、早退、缺席。每次实验都要穿白 大褂、禁止穿拖鞋。 ２、爱护仪器，厉行节约。取用试剂时，应仔 细辨明标签，以免取错。取完试剂后，应及时盖好 瓶盖，放回原处，切忌乱拿乱放、“张冠李戴”。 3 、注意安全、对于有毒、腐蚀的试剂更应注 意，应避免其直接接触人体及衣物。 4 、注意实验室卫生、整洁。废弃液体应倒入 水槽，放水冲走。实验用过的和棉花、废纸、沉淀 废渣及其他废弃物品等均应放入指定容器，不得随 意乱扔或丢进水槽。实验结束后应将实验台整理好。 并清扫、整理实验室。关好水、电、门、窗。 一、层析技术 ? 1 、层析技术概念 ? 2 、层析技术分类 ? 3 、常用层析技术原理 色谱起源 色谱 组分 色素 石油醚 碳酸钙颗粒 用色彩（ chroma ）和图谱（ graphs ）组成色谱 一词（ Chromatography) ，是 1903 年俄国植物学家 Michael Tswett 发现并命名的 ? 层析：是一种物理的分离方法，利用混合物中各 组分的物理化学性质的差别，使各组分以不同程 度分布在两相中，其中一相为 固定相 ，另一相流 过此相称作 流动相 ，并使各组分以不同速度移动， 从而达到分离的目的。 1 、层析技术概