细胞生物学课件：专题九、衰老.pptVIP

一 细胞衰老 （一）基本概念 cellular aging / cell senescence 100年前, 人们认为除单细胞原生生物外,多细胞生物的体细胞会衰老和死亡.－朴素观点 鸡心脏细胞无限生长和分裂（连续培养34年）、hela细胞系的建立等实验，证明了细胞“不死性”的观点：细胞本身没有衰老与死亡，细胞衰老的原因不在细胞本身，而是由于体内和体外环境的影响结果。－ 有实验根据 Hayflick Limitation（1961’）：细胞不是不死的，而是有一定的寿命；它们的增殖能力不是无限的，而是有一定的界限。即，细胞的增殖能力和寿命是有限的。 （二）细胞在体内条件下的衰老 细胞的衰老和死亡不仅发生在成体内，发育早期（蝌蚪尾和期）也有。 测定不同年龄小鼠小肠腺窝上皮细胞的周期长度，发现随年龄的增高，细胞衰老，细胞周期长度明显延长（主要G1期）。 周期的延长就是细胞分裂能力的下降，这种变化是由于体内环境影响的结果：小鼠皮肤移植实验——F1代、F2代……等，皮肤细胞的寿命明显长于小鼠寿命；老年骨髓造血干细胞复壮实验 （三）衰老细胞结构的变化 细胞核变化：随着细胞分裂次数的增加，核不断增大；核膜内折；染色质固缩；有的细胞核的核仁裂解为小体。 内质网变化：粗面内质网的总量呈减少趋势；原来的有序排列被打乱。体外培养的人胚肺成纤维细胞在26次倍增前内质网膜腔膨胀扩大，含有不定型的致密物，且为核糖体所覆盖；而40次以后细胞内质网膜腔未见膨胀，不定型致密物少，且具无核糖体覆盖区。 线粒体变化：数量减少，体积增大，有时外膜破裂。 （四）细胞衰老的机制 氧化损伤学说——细胞从外界摄取氧的2~3%在代谢过程中，产生活性氧基团或分子（reactive oxygen species,ROS）：超氧自由基（.O2）、羟自由基（.OH）、过氧化氢（H2O2）。它们可引发脂质、蛋白质和核酸分子的氧化性损伤，从而导致细胞结构的损伤和破坏。这些氧化性损伤的积累，最终导致细胞衰老。如果清除ROS，就可以延长寿命，如SOD。 有丝分裂钟学说——Telomere是染色体末端的一种特殊结构，其DNA由简单的串联重复序列组成。它们在细胞分裂过程中不能被DNA聚合酶完全复制，而是随细胞分裂的不断进行而逐渐变短。随着细胞的每次分裂，端粒不断缩短；当端粒长度缩短到一个阈值时，细胞就进入衰老。 端粒酶（Telomerase）可催化合成端粒重复序列并加在染色体末端。端粒酶由RNA和蛋白质组成，前者是合成端粒DNA的模板，后者是反转录酶亚基。生殖细胞和癌细胞中含有端粒酶。如果将端粒酶基因转染到正常人二倍体细胞中，可明显延长细胞寿命。 二、细胞凋亡 （一）细胞凋亡的概念及生物学意义 1965年Kerr观察大鼠肝细胞，在局部缺血条件下不断转化为膜包的小的圆形细胞质团，称此现象为“皱缩型坏死”。由于这些细胞质团是在生理条件下产生的，1972年改称为“细胞凋亡”。90年代后，方兴未艾。 细胞凋亡（apoptosis）——是一种主动的由基因决定的细胞自我破坏过程，自动结束其生命。由于细胞凋亡受到严格的由遗传机制决定的程序性调控，又称为细胞编程性死亡（programmed cell death,PCD）。 （二）细胞凋亡与坏死 细胞坏死与细胞凋亡是两种完全不同的过程和生物学现象，它是因病理而产生的被动死亡,细胞膜发生渗漏，细胞内容物释放到胞外，导致炎症反应。 （三）细胞凋亡的变化过程 形态学变化过程： 凋亡的起始——历经数分钟。细胞表面的特化结构（微绒毛）消失，细胞间连接消失，但细胞膜完整并具选择透性；线粒体基本完整，但核糖体逐渐从内质网上脱离，内质网囊腔膨胀，并逐渐与质膜融合；染色质固缩，形成新月形结构，沿核膜分布。 凋亡小体的形成——染色质断裂为大小不等的片段，与某些细胞器（线粒体）一起聚集，被反折的细胞膜所包围，使细胞表面形成了许多泡状或芽状突起。以后，逐渐分割，形成单个的凋亡小体。 凋亡小体逐渐为邻近的细胞所吞噬并消化。整个凋亡过程需要4~9小时。 （四）细胞凋亡的检测 主要基于DNA的断裂。 形态学观察—各种染色法：台盼蓝； DAPI是一种与DNA结合的荧光染料， 可观察细胞核的形态变化； Giemsa染色可以观察染色质固缩、趋边、 凋亡小体的形成等；透射电镜和扫描电镜。 两种染料复染更好。 DNA电泳—凋亡细胞中提取的DNA进行常规 琼脂糖电泳时，大小不等的DNA片段（180~ 200整倍数）呈现梯状条带。 （五）细胞凋亡的机制 1、caspase家族与凋亡 Cysteine aspartic acic specific protease是一组结构相关的半胱氨酸蛋白酶，存在于细胞质中，共同特点是能特异性断开