中药制剂检测技术 技能1：不同剂型样品的预处理 色谱分析法概论.pptx

色 谱 分 析 法 概 论;概述色谱法是一种重要的分离、分析技术。一、色谱法（起源）1906年，俄国植物学家茨维特（Tswett）首次研究了植物叶的色素成分。（如图）分析过程为离线的，即不能连续进行。人们将这种方法称为色谱法，随着色谱法的发展，可对大量无色物质进行分离，但仍沿用了色谱法这一名词。; 利用各组分物理化学性质的不同，在 流动相流经固定相时，由于各组分在两相 间的吸附、分配或其它亲和力的差异而产 生不同速度的移动，最终达到分离的目的。;; ;分离功能为主；定性鉴别专属性好，定量 分析准确灵敏快速。;二、色谱法特点 ①分离效率高 ②选择性好 ③集分离、分析于一体 ④灵敏度高（可测10-11—10-13g） ⑤分析速度快 ⑥易与其它仪器联用，应用范围广 ;第一节 色谱法的分类和发展;2.按分离原理分类 吸附色??? 分配色谱 色谱法 离子交换色谱 凝胶色谱（扩散）、 亲和色谱、络合色谱、热色谱等;3.按固定相形式分类 填充柱色谱 柱色谱 色谱法 毛细管色谱 纸层色谱 薄层色谱;柱色谱( column chromatography ): HPLC， GC etc.;;㈡色谱法的现状和发展趋势 1.新型固定相和检测器的研制 2.色谱新方法的研究 3.色谱联用技术 4.色谱专家系统;第二节 色谱过程和基本原理;二、色谱流出曲线和有关概念; 当试样流经色谱柱后，各组分随流动相的移动而在两相间反复进行吸附、解吸、或分配、萃取过程，最后依次得到各组分，将各组分浓度经检测器转换成电信号而记录下来，得到一条信号随时间变化的曲线，称为色谱流出曲线。;2.基线 操作条件稳定后，仅有流动相通过时，检 测器响应讯号随时间变化的曲线。 3.色谱峰（P339) 4.色谱峰区域宽度 它是组分在色谱柱中谱带扩张的函数，可反 映出色谱柱的分离效能;度量色谱峰区域宽度常用三种方法：;㈡保留值 保留值是试样各组分在色谱柱中保留行 为的量度，可反映出组分与固定相间作用力 大小。 1.死时间t0 不被固定相吸附或溶解的组分，即非滞 留组分（如空气???甲烷）从进样开始到出现 其色谱峰最大值所需的时间。它也是气体流 经色谱柱中空隙所需时间。;2.保留时间tR 某组分从进样到出现色谱峰最大值的时 间。它取决于色谱过程的热力学因素，是定 性依据。 3.调整保留时间tR′ 扣除死时间后的保留时间。 它反映了组分与固定相作用所消耗的时 间，是各组分产生差速迁移的物化基础。;4.死体积 V0 指在t0这段时间内通过色谱柱的载气体 积。即色谱柱内载气所占的体积。 V0 =t0 · Fc ( Fc，ml/min为流动相流速);6.调整保留体积 VR′ 指扣除死体积后的保留体积。 VR′= VR- V0 = tR′· Fc ; 相对保留值仅与柱温、固定相性质有关。可用 来表示色谱柱的选择性。 * r2，1 ↑，两组分越易实现分离。 * r2，1 =1时，两组分色谱峰重叠。;V0 和 Vm、t0 和 tm 的区别：;8.保留指数 I;㈢色谱峰高和峰面积 1.峰高h 是组分在柱后出现浓度极大时的检测 信号，即色谱峰顶至基线的距离。 2.峰面积A 色谱曲线与基线间包围的面积。;㈣分离度（分辨率）R; 因此，单独用柱效或选择性不能真实反 映组分在色谱柱中的分离情况，需引入一个 综合指标—分离度R 分离度：相邻两组分色谱峰保留值之差与 两组分色谱峰峰底宽度平均值之比。即; 理论证明，若相邻两色谱峰对称且满足 正态分布， 当 R1 两峰部分重叠 R=1.0 分离程度可达98% R=1.5 分离程度可达99.7% 通常，R=1.5作为相邻两峰完全分离的 标志。;R = 1.0 基本分离;色谱从流出曲线中，可得到重要信息： ⑴根据色谱峰的个数，可以判断样品中所含组分的最少数目； ⑵根据色谱峰的保留值，可以定性分析； ⑶根据色谱峰的面积和峰高，可以定量分析 ⑷色谱峰的保留值及其区域宽度，是评价色谱柱分离效能的依据； ⑸色谱峰两峰间的距离，是评价固定相（或流动相）选择是否合适的依据。;三、分配系数与色谱分离;2.保留因子k（分配比、容量因子）;3.分配系数和容量因子的关系;㈡分配系数和保留因子与保留时间的关系;见P343;㈢色谱分离的前提