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饲料中粗蛋白测定方法 1 、 原理 　　凯氏法测定试样中的含氮量，即在催化剂作用下，用硫酸破坏有 机物，使含氮物转化成硫酸铵。加入强碱进行蒸馏使氨逸出，用硼酸 吸收后，再用酸滴定，测出氮含量，将结果乘以换算系数 6.25，计算 出粗蛋白含量。 2 、试剂 2.1 硫酸（GB 625 ）：化学纯，含量为98 ％，无氮。 2.2 混合催化剂：0.4g 硫酸铜，5 个结晶水（GB 665 ），6g 硫酸钾 （HG 3—920 ）或硫酸钠（HG 3—908 ），均为化学纯，磨碎混匀。 2.3 氢氧化钠（GB 629 ）：化学纯，40 ％水溶液（m/V ）。 2.4 硼酸（GB 628 ）：化学纯，2 ％水溶液（m/V ）。 2.5 混合指示剂：甲基红（HG 3—958 ）0.1 ％乙醇溶液，溴甲酚绿 （HG 3—1220）0.5 ％乙醇溶液，两溶液等体积混合，在阴凉处保存 期为三个月。 2.6 盐酸标准溶液：邻苯二甲酸氢钾法标定，按 GB 601 制备。 2.6.1 盐酸标准溶液：c （HCl ）=0.1mol/L 。8.3mL 盐酸（GB 622，分 析纯），注入 1 000mL 蒸馏水中。 2.6.2 盐酸标准溶液：c （HCl ）=0.02mol/L 。1.67mL 盐酸（GB 622， 分析纯），注入 1 000mL 蒸馏水中。 2.7 蔗糖（HG 3—1001）：分析纯。 2.8 硫酸铵（GB 1396 ）：分析纯，干燥。 2.9 硼酸吸收液：1％硼酸水溶液 1 000mL，加入 0.1 ％溴甲酚绿乙醇 溶液 10mL，0.1 ％甲基红乙醇溶液7mL，4 ％氢氧化钠水溶液0.5mL， 混合，置阴凉处保存期为一个月（全自动程序用）。 3 、 仪器设备 3.1 实验室用样品粉碎机或研钵。 3.2 分样筛：孔径 0.45mm （40 目）。 3.3 分析天平：感量 0.0001g 。 3.4 消煮炉或电炉。 3.5 滴定管：酸式，10、25mL 。 3.6 凯氏烧瓶：250mL 。 3.7 凯氏蒸馏装置：半微量水蒸气蒸馏式。 3.8 锥形瓶：150、250mL 。 3.9 容量瓶：100mL。 3.10 消煮管：250mL 。 3.11 定氮仪：以凯氏原理制造的各类型半自动。 4 、 试样的选取和制备 　　选取具有代表性的试样用四分法缩减至 200g ，粉碎后全部通过 40 目筛，装于密封容器中，防止试样成分的变化。 5 分析步骤 5.1.1 试样的消煮 　　称取试样 0.5～1g （含氮量5～80mg ）准确至0.0002g，放入凯氏 烧瓶中，加入 6.4g 混合催化剂，与试样混合均匀，再加入 12mL 硫酸 和 2 粒玻璃珠，将 凯氏烧瓶置于电炉上加热，开始小火，待样品焦化， 泡沫消失后，再加强火力 （360～410 ℃）直至呈透明的蓝绿色，然 后再继续加热，至少 2h 。 5.1.2 氨的蒸馏：　 将试样消煮液冷却，加入 20mL 蒸馏水，转入 100mL 容量瓶中， 冷却后用水稀释至刻度，摇匀，做为试样分解液。将半微量蒸馏装置 的冷凝管末端浸入装有20mL 硼酸吸收液和 2 滴混合指示剂的锥形瓶 内。蒸汽发生器 的水中应加入甲基红指示剂数滴，硫酸数滴，在蒸 馏过程中保持此液为橙红色，否则需补加硫酸。准确移取试样分解液 10～20mL 注入蒸馏装置的反应室中，用少量蒸馏水冲洗进样入口， 塞好入口玻璃塞，再加 10mL 氢氧化钠溶液，小心提起玻璃塞使之流 入反应室，将玻璃塞塞好，且在入口处加水密封，防止漏气。蒸馏 4min 降下锥形瓶使冷凝管末端离开吸收液面，再蒸馏 1min，用蒸馏水冲 洗冷凝管末端，洗液均流入锥形瓶内，然后停止蒸馏。 　 5.1.2.3 蒸馏步骤的检验 　　精确称取 0.2g 硫酸铵，代替试样，按 5.1.2 步骤进行操作，测得 硫酸铵含氮量为 21.19 ±0.2 ％，否则应检查加碱、蒸馏和滴定各步骤 是否正确。 5.1.3 滴定 　　 5.1.2.1 或 5.1.2.2 法蒸馏后的吸收液立即 0.1mol/L 或 0.02mol/L （4.6.2 ）盐酸标准溶液滴定，溶液由蓝绿色变成灰红色为 终点。 6 、空白测定 　　称取蔗糖 0.5g，代替