检疫性细细菌病害.pptVIP

第六章 检疫性细菌病軎 植物检疫性病原细菌的检验方法 梨火疫病 Fire blight 玉米细菌性枯萎病 Stewart s bacterial wilt of cori 柑橘黄龙病 Citrus yellow shoot 椰子致死黄化病 Coconut Lethal Yellowing 复习思考题 植物病原细菌检疫检验技术 直接检测:直观检验和生长检验 间接检测 活菌检测 免疫吸附分离法 噬菌体检验 非活菌检测 血清学检测 1、活菌检测 分离培养法:营养培养基、选择培养基或鉴 别培养基分离纯化得到的细菌 浓缩接种及离体叶检测:提取液浓缩接种感 病植物,观测发病情况。 例如:浙江大学等在1%灭菌水琼脂中加 75×10-6的苯并咪唑,做平板,加感病植物 叶片,针刺十摩擦接种,培养(光、温、湿 度),短期获得症状。主要应用于水稻细菌 性条斑病菌和小麦细菌性黑颖病菌的检测。 2免疫吸附分离法 原理:接合血清学与平板分离技术,利用 与抗原高度亲和性的抗体,来捕获目标细 菌,样本中其他细菌均被冲洗掉,再将目 标细菌转移或释放到培养基上生长 方法:平皿免疫吸附评价测定法和免疫吸 附稀释培养法 平皿免疫吸附评价测定法简略流程如下: 常用溶入丙酮的硝酸纤 维素或指甲油作包被 洗涤液使用包被缓冲液 D 涤液洗后的测定点;C.所测样本的解 育;D.经洗涤后留下的免疫诱槽细菌 平皿免疫吸附评价测定 E在4℃下加人营养瞭:E.免 (immunosorption evaluation test 疫诱捕细菌在培养基中生长 3.噬菌体检验 原理:噬菌体侵染细菌,裂解寄主细胞, 在液体培养时,会使浑浊的细菌悬浮液变 清,在固体平板上培养,则出现许多边缘 整齐、透明光亮的噬菌斑。噬菌体具有专 化性,利用此特点,可鉴别细菌的种类 4.非活菌检测 非活菌检测的方法很多,下表是检测病原 细菌常用的一些方法,前9种血清学方法, 均属非活菌检测。它们既能用于病原鉴定, 又能直接用于病种或病株,甚至是无症感 染组织的检测 用于植物病原细菌鉴定和检测的主要方法 Duncan J.1992年基础上改编 大范围 鉴定和检测方祛 测定所需 「检测病株检测无症 应用 种子感染组 免疫扩散( Immunodiffusion 玻片凝集( Slide agglutination 乳胶凝集( Latex agglutination 5--60min + A蛋自共凝集〔 Protein A agglutination 免疫荧光( Immunofluorescent,]F) 免疫荧光吸附( mmunosorbent-IF 酶联免疫吸附试验(ELSA) 热计+ 1~3d+++++ 十 免疫荧光菌落染色( IF colony staining 免疫放射试验( Immuno- radiometnic assay 免疫分离( Immunoisolation) 多聚铺反应(PCR) 2~3h Biolog测定( Biolog test 4~241 肪酸分析( Fatty acid profiles) 蛋白质分析( Protein profiles) 营养试剂盒( Nutritional profile kits) 叶1 ①测定所需时间不包括分离和纯化 ②++为好用但有一定局限性;+为应用中有很大局限性;-为不能直接应用,A 5.血清学检验 原理 方法:酶联免疫吸附实验(ELSA)、免疫 荧光抗体法 免疫荧光抗体法:将荧光染料(异硫氢酸荧 光黄或罗丹明)与抗体以化学方法接合,再 与抗体反应,形成有荧光标记的抗体一抗原 复合物,在荧光显微镜下,可观察到黄绿色 荧光。 梨火疫病 Fire blight of pear ◆分布: 1878年首先由buri描述,在纽约发生, 后由 Erwin命名,是第一个被确定的植 物细菌病害。主要分布于北美洲于西 北欧,中欧、地中海、东南欧及大洋 和亚洲也有分布。大约40多个国家。