核酸分子杂的交和应用.ppt

核酸分子亲突 26.06.2020  核酸分子杂交:来源相同或不同的 DNA甚至DNA与RNA分子变性后,在 合适的条件下通过减基互补形成双链 杂交体的过程称核酸分子杂交 ( molecular hybridization)。核酸分子 杂交技术是目前生物化学和分子生物 学研究中应用最广泛的技术之一,也 是临床分子检验的重要技术。「 26.06.2020  52 0 Sample 1 Sample 2 Mix Duplex of Hybrid Duplex of 26.06.2020 duple  核酸探针的标记 探针( probe)是指用放射性核素或其 辶标记物标记的核酸片段。 放射性标记 标记物 生物素标记 非放射性标记〈地高辛标记 类光素标记 26.06.2020  探针的种类 DNA探针:双链或单链DNA探针是最常用 的核酸探针。长度在几百碱基对以上。 DNA探针又分为: 基因组DNA探针:有细菌、病毒、原虫 真菌、动物和人类细胞DNA探针,多为某 基因的全部或部分序列,或某一非编码 序列 CDNA探针:以mRNA为模板经过逆转录酶 催化产生的互补于mRNA的DNA链。 26.06.2020  探针的种类 DNA探针优点 一般克隆在质粒载体中,可以无限繁殖; 2、DNA探针不易降解 3、DNA的标记方法比较成熟。 26.06.2020 6  探针的种类 ·RNA探针:可以是标记分寓的RNA,也可 以是重组质粒在RNA聚合酶作用下的转录 产物。其优点是 RNA探针为单链,复杂性低,与靶序列杂 交反应效率极高 因不存在重复序列,因此特异性高 本底低 缺占 26.06.2020  探针的种类 寡核苷酸( oligo)探针:由17~50mer组成的 短探针 优点 可根据需要人工合成相应的序列; 因片段短,只有一个核苷酸突变,其Tm值 也有明显变化,特别适用于点突变的检测 杂交速度快特异性强 缺点:所带标记物少灵敏度低;片段短杂 交体不稳定  探针的标记 °切口平移法 标记原理:是目前实验室是最常用的一种 脱氧核糖核酸探针标记法。利用大肠杄菌 DNA聚合酶1的多种酶促活性将标记的 dNTP掺入新合成DNA链中使探针被标记。 带缺口(nick)的线状、超螺旋及环状双链 DNA均可作为切口平移法的模板。 26.06.2020  DNase dNA Pol l. a-32P-dNTP 26.06.2020