呋喃它酮代谢物(AMOZ)酶联免疫检测..docxVIP

呋喃它酮代谢物 (AMOZ) 酶联免疫检测 试剂盒使用说明书 本试剂盒仅供研究使用 产品编号： CSB-E12039f 最低检测限：本试剂盒对各种组织的最低检测限为 0.1 ng/ml，平均回收率为75%?105%, 板内、板间变异系数均小于 10％，标准曲线如图 1 所示。 特异性： 本试剂盒可用于快速检测 AMOZ ,与其它化合物无明显交叉反应。 有效期： 6 个月 预期应用： 本试剂盒可以快速检测猪、鸡、鱼、虾、蟹组织和牛奶、蜂蜜中的 AMOZ 残留, 适合在畜禽、水产养殖场、加工厂、内外贸易口岸、集贸市场以及药物残留监控部门使用。 说明 1 ?试剂盒保存：-20C (较长时间不用时)；2-8C(频繁使用时)。 2．浓洗涤液低温保存会有盐析出,稀释时可在水浴中加温助溶。 3?中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。 4 ?刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造 成任何影响。 概述 硝基呋喃类药物是人工合成的广谱抗生素,它有非常好的抗菌作用和药动力学的特性, 曾经被广泛应用,作为猪、禽类和水产促生长的添加剂。 但研究发现, 硝基呋喃类的药物和 代谢物均可以使实验动物发生癌变和基因突变。 1995 年,呋喃它酮被欧洲禁止用于治疗和 饲料中。 由于硝基呋喃类药物在体内很快就能被代谢, 而在组织中结合的代谢产物则能存留 较长的一段时间,所以在分析呋喃它酮的残留时经常要分析其代谢后的产物 AMOZ 。通常 是用 LC-UV , LC-MS 和 LC-MS/MS 法来检测呋喃它酮, 但这需要特殊设备和一定的技术要 求,且时间相对较长。而酶联免疫方法则利用 AMOZ 的特异性抗体,同时结合色谱技术来 检测呋喃它酮代谢物含量。具有高精确度,反应灵敏,技术要求不高和检测时间短等优点。 我公司自主研发的呋喃它酮快速检测试剂盒利用竞争抑制酶标免疫分析法, 来检测动物组织 (肉、肝脏) 、蜂蜜和鱼虾等样本中的呋喃它酮药物残留。 实验原理 本试剂盒应用竞争抑制酶标免疫分析法测定标本中待测物质水平。 在酶标板微孔中同时 加入标准品或样品溶液、 AMOZ 特异性抗体工作液和酶标抗体工作液,游离的 AMOZ 与包 被在酶标板上的 AMOZ 竞争特异性抗体结合位点,同时特异性抗体与酶标抗体结合。经过 彻底洗涤后用底物 TMB 显色。 TMB 在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下 转化成最终的黄色。待测标本浓度越高,标记抗原和抗体的结合就越受到抑制,显色愈浅。 显色的深浅与酶量呈正相关,而与样品中待测物质含量呈负相关。用酶标仪在 450nm 波长 下测定吸光度( OD 值),计算样品浓度。 试剂盒组成及试剂配制 酶联板 (Assay plate ) ：一块( 96 孔)。 标准品(Standard ): 2X100(1/瓶(8 ng/ml)。 样品稀释液(Sample Diluent ): 1 20ml/瓶。 辣根过氧化物酶标记 AMOZ结合物(HRP-AMOZ ) : 1 X100 1瓶(1: 100)。 辣根过氧化物酶标记 AMOZ结合物稀释液(HRP-AMOZ Diluent ) : 1 x 10ml/瓶。 底物溶液(TMB Substrate ) : 1 X0ml/瓶。 浓洗涤液(Wash Buffer ): 1 X20ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释 25倍。 终止液（Stop Solution ）： 1 xiOml/瓶（2N H2SO4）。 需要而未提供的试剂和器材 标准规格酶标仪 高速离心机 超声清洗器 氮气吹干仪 干净的试管和 Eppendof 管 系列可调节移液器及吸头，一次检测样品较多时，最好用多通道移液器 蒸馏水，容量瓶等 样品处理方法： 称取2g均质组织于50ml塑料离心管中，加入 4.5ml蒸馏水、0.5ml 1mol/L HCl和100 4 辅助提取剂，混匀静置 10min； 加入 5ml 样品稀释液、 0.4ml 1M NaOH 混合均匀， 5000 r/min 离心 5min； 将 8ml 上清液转入新的离心管，加入 8ml 乙酸乙酯，剧烈振荡后 5000 r/min 离心 5min ； 将5ml上清转入另一离心管 50C水浴氮气吹干，加入 1ml样本稀释液，漩涡 15秒，调 pH7.4，取150 4用于分析。 标本的稀释原则： 首先通过文献检索的方式了解待测样本的大致含量， 确定适当的稀释倍数。 只有稀释至标准 曲线的范围内， 检测的结果才是准确的。 稀释的过程中， 应做好详细的记录。最后计算浓度 时，稀释了 “ N倍，标本的浓度应再乘以 “ N。 标准品的稀释原则：2瓶，每瓶浓度为8 ng/ml，以样品稀释液做系列倍比稀释，分别稀释 8 ng/ml, 4 ng/m