{技术规范标准}血吸虫病免疫诊断技术规范.pdfVIP

一、目前常用的血吸虫病免疫诊断类型与方法 直接凝集试 正向间接凝集试验间接红细胞凝集试验（IHA） 1) 凝集反应 间接凝集试 反向间接凝集试 间接凝集抑制试 2) 沉淀反应 环卵沉淀试验（COPT） 经典的免疫电泳技术 对流免疫电泳 酶标记抗原对流免疫电泳 3) 免疫电泳技术 双向酶标对流免疫电泳 免疫印迹技术 酶免疫测定酶联免疫吸咐试验（ELISA） 免疫荧光法 放射免疫测定法 4) 免疫标记技术 免疫胶体金技 斑点金免疫渗滤试验（DIGFA渗滤法） 免疫胶体染料试验胶体染料试纸条试验（DDIA层析法） 化学发光免疫分析 二、未稍采血（塑料管法）操作规程 1．采血部位 通常取手指或耳垂。耳垂末梢血循环较差，受气温影响较大，冬季最 好不用；由于耳垂采血痛感较轻，病人容易接受，可先充分按摩，改善耳 垂末梢循环。手指采血应选择无名指。 2．采血器材 一次性三棱针或弹簧刺血针、75%的酒精、无菌脱脂棉球、聚乙烯塑 料管（直径2mm，长8cm）、镊子、酒精灯等。 3．采血方法 1）以手指按摩采血部位，使局部充血，再用75%酒精棉球消毒皮肤。 2）待干后用左手固定采血部位，右手持消毒针迅速刺入皮肤2-3mm，取 出刺针，血液即自行溢出。如血流不畅，可于四周稍加压力。 3）用消毒干棉球擦去第一滴血液，以后流出的血即可采用。 4）用塑料管进血口靠近血滴让血液自行流入管内，采集＞3cm血液 (一次检测)。 5）采血完毕，刺处用消毒棉球拭擦干净。 6）采血后的塑料管将进血端留一小段空隙，靠近酒精灯烧熔管口，用镊子轻 轻夹住已基本溶化的采血管进血端约10秒,将进血端牢牢封住,贴上标签。 7）塑料管封口端朝下垂直于容器中，待血清自然析出或离心后，剪去塑料管之 血球部分，将血清移至中部，用于检测。或两端封口后放冰箱保存备用。 4．注意事项  采血部位要严格消毒，做到一人一针；采血针忌用注射针头；采血针刺入速 度要迅速；有炎症部位不能采血；采血时切忌用力挤压；采血后伤口继续出 血应用干棉球压迫；  用塑料管收集血液时应尽量避免空气进入管内;如果空气进入管内可将塑料管 的另一端位置提高,以排除空气,然后继续采集血液到指定位置  可用普通离心机低速 (1000-1500转)离心5分钟,以分离血清，防止离心过速或 过长。  塑料管封口要严密，防止血液流失。  用剪刀剪塑料管时应保持剪刀的清洁，避免交叉污染。  分离后的血清（或血浆）样品可置冰箱保存。  实验废弃物应按照相关规定处理，严禁随意丢弃。 三、间接红细胞凝集试验 ( IHA)操作规程 1 基本原理 抗原吸附于经适当处理的红细胞表面，使红细胞致敏。致敏红细胞与病人 血清中特导性抗体（抗SEA特异性抗体）相遇时，在适宜的条件下（电解 质、温度、pH），抗原与特导性的抗体相结合，使红细胞出现肉眼可见的 凝集反应。为正向间接凝集。 2 冻干致敏红细胞的制备工艺  血吸虫虫卵抗原制备  红细胞醛化  红细胞鞣化  红细胞致敏  致敏红细胞的冰冻干燥 致敏的新鲜红细胞保存时间短，且易变脆、溶血和污染，只能使用2 3 天。新鲜红细胞能吸附多糖类抗原，但吸附蛋白质抗原或抗体的能力较差。