【培训课件-临床色谱质谱检验技术】_色谱质谱技术的其他常见应用（三）.pptVIP

复习 《临床色谱质谱检验技术》 主要内容 质谱技术在临床实验室中的应用（二） 小结与思考 《临床色谱质谱检验技术》 复习 ICP-MS的技术特点？ ICP-MS检测全血Pb中，加入硝酸和曲拉通的作用？ 复习 复习 ICP-MS的技术特点 分析元素覆盖面广（可达73元素），分析速度快 检出限低（多数元素检出限为ppb-ppt级） 线性范围宽（可达9个数量级） 谱图干扰少（原子量相差1可以分离） 能进行同位素分析 多种进样技术联用 ?血液样品的特点： ?黏度大 ?基体复杂 ?含较多细小颗粒物 ?蛋白质容易沉降 ?检测过程易出现的问题： ?容易漂移 ?样品不均匀 ?易堵（雾化器） ?稳定性较差 复习 解决办法： ?选择合适的酸度和曲拉通浓度稀释样品： ?酸度（破坏红细胞）：过小，红细胞破坏不完全；有些元素的等离子体行为受影响；过大，造成蛋白质沉降； ?曲拉通（防止样品沉降）：浓度过小，不能有效地防止沉降；过大，溶液黏度大，容易起泡，造成精密度差。 复习 《临床色谱质谱检验技术》 质谱技术在临床实验室中的应用（二） 回顾 什么是质谱分析？ 质谱分类有哪些？ 色谱质谱联用仪的组成？ ?质谱分析：是分离和检测带电物质的质量差异的一类分析方法； ?质谱仪：本质上是测量离子质荷比的分析仪器，是将被测物质离子化后，按照离子的质荷比分离，测量各种离子峰的强度而实现分析的仪器； 3 8 5 4 2 dime penny nickel quarter half $ Value (m/z) Quantity (Abundance) MS 回顾 回顾 回顾 其中质谱技术（除联用技术外）在临床实验中主要有以下的应用： ?电感耦合等离子体质谱技术（ICP-MS）应用于元素分析 ?三重四级杆技术应用于遗传代谢性疾病检测 ?基质辅助激光解析-飞行时间质谱技术应用于微生物鉴定 质谱技术在临床实验室中的应用 质谱技术在临床实验室中的应用 样品处理方法建立 色谱方法建立 信息及文献检索 质谱方法建立 样品采集 样品制备 数据 处理 分析测定 信息及文献检索 遗传代谢病又称先天性代谢异常(inherited metabolic diseases，IMD) ，是指有异常生化代谢标志物的一大类疾病； 因基因突变使合成的酶、受体、载体等蛋白功能缺陷，导致体内生化物质在合成、代谢、转运和储存等方面出现各种异常，包括氨基酸、有机酸、碳水化合物、脂肪苏、内分泌激素、核酸、金属元素等代谢紊乱，也包括有些代谢物在溶酶体、线粒体、过氧化物酶体等细胞器内积聚、贮积异常，产生一系列临床症状的一大类疾病； 属于单基因遗传病的一部分，绝大多数属常染色体隐性遗传，少数为常染色体显性遗传、X连锁伴性遗传，或者线粒体遗传； 遗传代谢病病种繁多，常见500-600种，总数可能达数千余种；单病发病率低，但总体发病率较高，有报道患病率在0.5%以上。 信息及文献检索 遗传代谢病发病机制： 信息及文献检索 基因检测 酶活性 测定 质谱检测 临床诊断 基因突变 蛋白质 改变 代谢异常 临床表现 信息及文献检索 信息及文献检索 信息及文献检索 临床患儿 怀疑氨基酸、有机酸、脂肪酸氧化代谢病 怀疑溶酶体贮积、糖原累积等大分子病 质谱检测（血氨基酸、酰基肉碱，尿有机酸检测） 酶活性检测 基因检测（Sanger、NGS、aCGH测患儿及其父母） 信息及文献检索 新生儿喂奶三次后采血 酶活性检测 串联质谱检测（血氨基酸、酰基肉碱检测） 气相色谱质谱检测（尿液有机酸检测 基因检测（Sanger、NGS、aCGH测患儿及其父母） 怀疑 新生儿 分析测定方法 液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS） 血氨基酸和酰基肉碱：一滴血一次实验检测数十种氨基酸、酰基肉碱，检测指标100余项； 结合每种疾病的发病特点，将检测指标的浓度与疾病相关联，综合判断40余种遗传代谢病（包括氨基酸代谢病、有机酸血症、脂肪酸氧化缺陷病） 气相色谱质谱（GC-MS） 尿液有机酸：一次性检测130余项有机酸指标，可辅助诊断40余种遗传代谢病（主要为有机酸血症，也包括氨基酸代谢病及脂肪酸氧化缺陷病） 分析测定方法 衍生化前处理方法： 样品处理过程中加入盐酸正丁醇，引入丁基； 氨基酸和酰基肉碱经衍生化，形成相应的丁酯，屏蔽酸性基团； 酯化作用可减少潜在的溶剂或其他物质干扰，提高离子化效率。 检测准备 打孔 添加内标 离心 氮气吹干 衍生化 氮气吹干 复溶 分析测定方法 非衍生化前处理方法： 无需使用盐酸正丁醇，使用甲醇萃取后可直接进样； 节省预处理时间； 二羧酸酰基肉碱（如C5DC）存在两个负电荷位置，离子化效率受影响。 检测准备 打孔 添加内标 转移待测 分析测定方法 三重四级杆