生物工程设备及操作技术 中空纤维酶膜反应器的操作实训 中空纤维酶膜反应器的操作实训.docVIP

PAGE PAGE 1 任务9.4 中空纤维酶膜反应器的操作实训 一、实训目的 （1）掌握固定化酶膜反应器装置的结构、工作原理和操作步骤； （2）掌握分体式酶膜反应器装置的结构、工作原理和操作步骤； （3）掌握评价酶膜反应器评价指标的测定方法。 二、中空纤维酶膜反应器简介 1.固定化酶膜反应器 固定化中空纤维酶膜反应器，设备装置分为三个大部分:温控系统、搅拌系统和反应系统。如图9.4-1所示。 图9.4-1固定化酶膜反应器 2.分体式酶膜反应器 图9.4-2分体式固定化酶膜反应器 整个装置分为四个部分:反应系统、搅拌系统、温控系统和膜分离系统。反应系统有效容积500ml。如图9.4-2所示。 3.中空纤维膜组件 设备中所使用的膜组件是内压式PPESK中空纤维膜组件，如图9.4-3，具体的参数为:纤维内径800-900μm，壁厚 150～200μm，截留分子量PEG6000，有效膜面积约为0.013m2，反应液流经纤维内腔，渗透液流经纤维外侧。 图9.4-3 中空纤维膜组件 三、实训内容 以5-核苷酸生产为例。 1.固定化酶膜反应器装置的操作 如图2.4-1所示，将一定浓度底物溶液定量加入反应罐中，升温至定值，保温10mln。开动搅拌系统。打开阀1，关闭阀2，调节到实验所设计的系统参数，稳定操作。定时取样（取样时打开阀2，关闭阀1），分别测定渗透液和反应液中RNA含量与5-核昔酸含量，同时测定膜的渗透通量。间隔一段时间补充底物溶液，维持体系的体积平衡。反应过程中，密切关注体系的pH和温度变化，使pH值和温度维持在所需范围内。 2.分体式酶膜反应器装置的操作 如图2.4-3所示，将一定浓度底物溶液定量加入反应罐中，升温至定值，保温10分钟。开动搅拌系统，定量加入配好的酶液。打开阀1，关闭阀2，调节到实验所设计的系统参数，稳定操作。定时取样（取样时打开阀2，关闭阀1），分别测定渗透液和反应液中RNA含量与5-核昔酸含量，同时测定膜的渗透通量。间隔一段时间补充底物溶液，维持体系的体积平衡。反应过程中，密切关注体系的pH和温度变化，使pH值和温度维持在所需范围内。 3.固定化酶膜的制备 配制 0.5mol/L，醋酸缓冲溶液（pH为5.4）50ml，加入5g明胶，用去离子水定容至500ml，加热搅拌，使明胶充分溶解，加入0.5g酶，搅拌使其溶解。在室温、表压 0.15MPa下内压错流过滤通过PPESK中空纤维膜组件，然后用2%的戊二醛在0.1MPa、35℃下内压错流过滤，使其活化，制成的固定化酶膜湿态保存。 4.操作记录 时间 （h） RNA mg/ml 5-核昔酸 mg/ml RNA酶解率 (%) 酶膜反应器生产能力 转化率 (%) 5.相关指标测定与计算 （1）RNA含量测定 采用紫外吸收法测定RNA含量。具体操作如下:取两支小试管，甲试管加入0.5而样品和0.5ml去离子水;乙试管加入0.5ml样品和0.5ml核酸沉淀剂，摇匀，冰浴冷却30min，以3000RPM离心10min。分别移取0.4ml上清液置于两个50ml容量瓶中，定容至刻度，用紫外吸收法测定 260nm处的吸光度。RNA含量按下式计算: RNA浓度（ug/ml）=△A260×稀释倍数/(0.024×L) 式中，△A26O为甲管稀释液在 260nm波长下的吸光度减去乙管稀释液在 260nm波长下的吸光度。L为比色皿的厚度，一般为1或0.5cm，0.024为每ml溶液中含有1ugRNA的吸光度。 RNA%=待测液中测得的RNA质量×100/待测液中制品的质量 （2）5-核昔酸含量测定 采用紫外吸收法测定，具体操作同上述。5-核昔酸含量按下式计算: 5-核昔酸浓度(mg/ml)= △A260×稀释倍数×340/10570 式中，△A260为上述乙试管稀释液在 260nm下以0.01MHcl为空白测得的吸光度，测定值在0.3～0.7范围内，超出此范围需要稀释一定倍数；340为混合5-核着酸平均分子量；10570为平均摩尔消光系数。 （3）RNA酶解率的计算 RNA酶解率是指经核酸酶Pl降解后生成的5-核昔酸的量占RNA总量的百分比。对于RNA和5-核苷酸而言，反应体系的总体积一致，为方便计算，我们取二者浓度的百分比作为分析指标。计算公式如下: RNA酶解率(%)=(Ct-C0) ×100/Co,RNA 式中，Ct为t时刻5-核苷酸的瞬时浓度;C0为5-核苷酸的初始浓度；CO，RNA为RNA的初始浓度。 （4）酶膜反应器生产能力的计算 反应器生产能力由下述公式计算: 式中:P一一渗透液一侧酶解产物浓度(mg/ml)； J一一单位面积膜渗透通量(ml/min)； E一一酶浓度（mg/ml)； V一一反应体积（ml）。 参数K量纲为而/min，表示单位时间内按酶量