乳制品加工技术 检测仪器说明书 010-J۸SCO高效液相色谱仪操作说明.docVIP

J?SCO高效液相色谱仪操作说明 J?SCO高效液相色谱仪操作说明 J?SCO高效液相色谱仪操作说明 1．组成 高效液相色谱仪由泵PU-980、PU-986、定量进样器（20μl）、色谱柱、紫外－可见光检测器UV-975和Chrom King色谱工作站组成。 2．高效液相色谱仪的使用要求 （详见岛津高效液相标准操作规程）。 3．操作前的准备 （详见岛津高效液相标准操作规程）。 4．操作 4.1泵的操作 4.1.1用流动相冲洗滤器，再把滤器浸入流动相中，先打开主动泵的电源开关，再打开从动泵电源开关，启动泵。主动泵按SHIFT+▼，需手动检测通过，从动泵不用。 4.1.2逆时针旋转主动泵与从动泵的排放阀，使之处于打开状态，用专用注射器从阀口抽出流动相约20ml后，按两泵PUMP键， 进行充泵排气（可以改变流速，加大流速，按FLOW键，输入流速后，按ENTER，加速排气），观察出口处流动相呈连续液流后，再按两泵PUMP，停止冲洗，顺时针旋转排放阀至底，关闭排放阀。 4.1.3点按FLOW键一次，至流速闪烁，点按数字键将流速调节至分析流速并点按Enter键确认，再点按FLOW键一次，至P max闪烁(最高柱压)，点按数字键调节至所设最高柱压，并点按ENYER键确认，再点按FLOW键一次，至P min闪烁(最低柱压)，点按数字键调节至所设最低柱压（一般为0），并点按ENTER键确认，点按PUMP键对色谱柱进行平衡，同时观察压力指示应稳定，用干燥滤纸片的边缘检查柱管各连接处应无渗漏。初始平衡时间一般约需30分钟。 4.1.4输入洗脱程序：按PRGM→▼（改变时间或配比按ENTER建，确定也按ENTER建，继续下一步按▼），输入结束，按PRGM，再按MONIT。 4.1.5基线平衡后，点页面single输入文件名，点OK，注入供试品，计量环与回车键同时按下，马上按主动泵PRGM RUN与检测器ZERO，即显示供试品曲线。（随时间变长，主动泵压力变小），按MONIT可以查看洗脱状态，再按此键，可恢复原状态。 4.1.6 检测结束后，点击STOP窗口，再按主动泵上的PRGM RUN。 4.1.7 进下一个样时，需等主动泵压力恢复原始状态，操作同4.1.5。 4.2紫外可见检测器的操作 4.2.1打开检测器的电源开关POWER～，启动检测器。 4.2.2点按W.L键一次，至波长闪烁，点按数字键将波长调节至分析用波长并点按ENTER键。 4.3Chrom King工作站的操作 4.3.1先打开显示器电源开关，再打开主机电源开关。 4.3.2用鼠标双击Chrom King快捷键图标，输入密码（DEMO）后，再双击Acquiremrnt1进入工作站。 4.3.3根据分析要求选定相应的方法及文件名后进行数据采集。 4.4定量进样阀操作 4.4.1把进样阀手柄放在载样位置(LOAD)。 4.4.2用供试溶液清洗配套的注射器，再抽取不少于定量环容积的5倍即不少于0.1ml，在排除气泡后方能向进样器中注入供试溶液。 4.4.3把注射器的平头针直插至进样器的底部，注入供试溶液，注射器不应取下。 4.4把手柄转至注样位置(INJECT)，定量环内供试溶液即被带入流路。 4.5色谱数据的收集和处理 4.5.1注样的同时（选好相应的实验方法及文件名），计量环与回车键同时按下，即显示供试品曲线。 4.5.2最后一峰出完，应继续走一段基线，确认再无组分流出，方能结束记录（点STOP窗口）。 4.5.3点击Analyze，即可对谱图进行积分处理。 4.5.4含量测定的对照溶液和样品供试溶液制备2份平行样，每份至少进样2次，求得平均值，相对偏差（RSD）应不大于1.5％。 4.5.5色谱系统适用性试验应符合中国药典的要求，如按指定峰计算的理论板数（n）和拖尾因子（T），以及相应邻峰之间的分离度（R）。其结果可通过工作站相应工具查看。 4.6测定结果处理 通过工作站的相应工具计算。 4.5清冼和关机 4.5.1分析完毕后，先关检测器，从动泵和工作站，再用适当经滤过和脱气的溶剂清洗色谱系统。反相柱（十八烷基键合硅胶）如使用过含盐流动相，则先用水，然后用甲醇-水冲洗，冲洗前先按（4.1.1～4.1.2）操作，再用分析流速冲洗，各冲洗溶剂一般冲洗 15～30分钟，特殊情况应延长冲洗时间。 4.5.2冲洗完毕后，点按PUMP键，待流柱压降为“零”时，按下主动泵电源开关，停泵，同时进样阀也应相应溶剂清洗。 4.5.3断电源，作好使用登记，内容包括日期，检品，色谱柱代号，流动相，柱压，使用小时数，仪器状态。 4.6注意事项（详见岛津高效液相标准操作规程）。