CNASGL41临床微生物检验程序验证指南.pdfVIP

导读 包括显微镜检查、分离培养及鉴定、药敏试验等在内的临床微生物的检验方法（检 验程序）如何验证？很多人对此非常困惑。由 CNAS2016.5.30 新鲜发布的《临床 微生物检验程序验证指南》犹如一盏明灯给大家指明了具体的方向。虽然是针对 认可实验室制定的指南文件，其他实验室亦可参考。 部分内容节选 显微镜检查 4.3 显微镜检查 显微镜检查程序包括涂片制备、染色镜检和结果报告过程。实验室在开展各种类 型显微镜检查（如革兰染色、抗酸染色、墨汁染色等）前应对本实验室使用的检验程 序进行验证，并由经培训有涂片镜检能力的实验室人员操作。检查方法可包括手工染 片法和自动化染片法。所有样品及其盛放容器均应当作有传染性物质，并按照实验室 生物安全要求进行操作。 4.3.1 验证要求 显微镜检查程序的验证应包括能力验证/实验室间比对和实验室内人员比对（当多 名人员从事该项目时）。如果没有可获得的能力验证或室间质评，实验室应自行组织实验室 间比对（宜与通过认可的实验室比对）。若实验室同时开展手工染片法和自动化染片法，应 进行两种方法的实验室内部比对。 4.3.2 比对方案 4.3.2.1 样品数量 每项检查应使用至少 5 份样品进行验证，覆盖全部样品类型，无菌样品类型包含 阴性和阳性结果。实验室应优先使用已知结果的留样样品，当不可获取时可采用模拟 样品。 4.3.2.2 检验程序 按临床标本常规方式处理,由本岗位工作人员使用实验室检验程序进行涂片制备、 染色、镜检、判读。 4.3.2.3 结果报告 根据实验室程序文件规定进行结果报告，其中抗酸杆菌应根据 “分级报告标准” 报告镜检结果。 4.3.3 可接受标准 每项检查的比对结果符合率≥80% 。 1 分离培养 4.4.1 血培养 血培养检验程序包括从病人血液采集、运送、接收、孵育及监测的全过程。目前临床实验室 广泛使用全自动血培养系统。临床微生物实验室血培养系统性能验证的主要目的是评估系统 使用的培养基能否用于培养临床常见微生物（包括酵母菌、厌氧菌、苛养菌等）以及仪器（自 动化系统）能否及时检测出血液中的大部分病原菌。 血培养性能验证常用留样验证和血培养系统平行比对两种方法。血培养系统平行比对用于评 估验证系统和参比系统检出细菌能力的一致性，但需要样本量大，临床采样有难度。留样验 证的优点则在于可评估其检测不常见病原菌的能力。实验室可根据医院病人数量和地区、病 种特征等具体情况和两种方法的特点选择其中一种适宜的验证方法，或两种方法同时应用。 4.4.1.1 留样验证 4.4.1.1.1 验证要求 验证应覆盖临床常见微生物,需氧成人/儿童血培养瓶验证菌株应包括需氧/兼性厌氧革兰阳 性菌、需氧/兼性厌氧革兰阴性菌、苛养菌 （如：流感嗜血杆菌、肺炎链球菌等）和真菌， 厌氧血培养瓶验证菌株应包括兼性厌氧革兰阳性菌、兼性厌氧革兰阴性菌、专性厌氧菌，其 他特殊用途血培养瓶参照厂家要求选择合适类型菌株进行验证。每种类型至少１株，总体不 少于 15 株。应尽可能使用真实患者的临床分离菌株 （性能验证用临床留样菌株宜经质谱或DNA 序列分析确认）。对于特殊、苛养菌可使用标 准菌株或质控菌株。某些特殊菌株需要在培养瓶中加入无菌、未使用抗生素的厂家推荐血液 标本，如不加可能不生长，如流感嗜血杆菌。 4.4.1.1.2 验证方案 模拟临床血流感染患者的细菌含量，用留样菌株进行一系列稀释，接种细菌的最 终浓度为 5-30CFU/瓶。若苛养菌需添加适量的新鲜无菌血液（成人瓶 5-10ml，儿童瓶 1-3ml） 后置于血培养系统上进行培养、检测。 4.4.1.1.3 可接受标准 如果在厂家说明书规定时间内检测出所有菌株则该方法通过验证。 3 天时间应足以 检测出至少 95%的临床相关细菌， 须具备苛养菌、真菌、厌氧菌等的检出能力。 若未能检 出应使用相同菌株进行重复试验来验证。若仍不能检测，实验室和/或制造商应在临床使用 该系统前采取纠正措施。如果血培养仪升级，原系统和新系统的差别不大，培养瓶也没有改 变，那么由供应商技术代表核查仪器性能即可，无需再次验证。功能核查将对孵育系统和光 学系统以及软件是否按照制造商规定运行进行评价。 4.4.1.2 血培养检测系统比对 4.4.1.2.1 验证要求 因血培养检测系统比对要求较高，并非强制要求执行。同一厂家由同一系统控制采集 数据的多个血培养模块不需进行比对。 检测系统比对允许根据患者情况和实验室条件来评价新系统的性能，通常比对所