双三氟虫脲对斜纹夜蛾繁殖和卵黄原蛋白及其受体表达的影响.pdfVIP

摘要 斜纹夜蛾Spodoptera litura (Fabricius ）是一种世界范围内广泛分布的杂食性害虫， 由于其防控过度依赖化学杀虫剂，加之其繁殖迅速，已对多种传统化学杀虫剂产生了严 重的抗药性。双三氟虫脲是一种抑制昆虫几丁质合成，具有较高特异性的昆虫生长调节 剂。本文测定了四川5 个地区斜纹夜蛾田间种群对6 种杀虫剂的抗药性水平，并以对双 三氟虫脲抗性最高的大邑种群为亲本，双向筛选得到双三氟虫脲敏/抗同源品系，采用 两性生命表研究法研究了敏/抗双三氟虫脲品系生长发育和繁殖的差异，qRT-PCR 分析 了敏/抗品系蛹和雌成虫卵黄原蛋白（Vg ）及其受体（VgR ）表达的时序变化，转录组 测序分析了敏/抗品系Vg 和VgR 基因表达及影响其生殖力关键通路的基因，初步阐明 了斜纹夜蛾对双三氟虫脲产生抗性的过程中，Vg 和VgR 基因表达以及生殖力差异的分 子机制。现将全文总结如下： 采用胃毒法测定了高效氯氰菊酯、毒死蜱、甲氨基阿维菌素苯甲酸盐、甲氧虫酰肼、 茚虫威和双三氟虫脲对斜纹夜蛾室内敏感品系（Lab-HN 品系）和5 个田间种群（眉山 MS 、乐山LS、彭州PZ 、大邑DY 和宜宾YB ）的毒力。结果表明，所有种群对高效氯氰 菊酯和毒死蜱均表现为高抗水平 （抗性倍数分别为5574.3 ~ 9003.7 倍和185.0 ~ 941.4 倍）；对甲氨基阿维菌素苯甲酸盐、甲氧虫酰肼、茚虫威和双三氟虫脲均表现为中等抗性 水平 （抗性倍数分别为12.5 ~ 40.0 倍、28.2 ~ 36.1 倍、12.0 ~ 21.5 倍和15.9 ~ 77.7 倍）。 以对双三氟虫脲抗性最高 （抗性倍数为 77.7 倍）的大邑种群为亲本，进行双向筛选。 经过连续6 代筛选后，Bis-UNSEL 品系相对于Lab-HN 品系，对双三氟虫脲表现为敏感，而 Bis-SEL 品系抗性倍数上升至113.8 倍。采用两性生命表理论研究了Bis-UNSEL / Bis-SEL 品系各年龄阶段生长发育参数的差异。结果表明，Bis-SEL 品系成虫总产卵前 期（TPOP ）较Bis-UNSEL 品系显著缩短，而Bis-SEL 品系产卵量升高。Bis-SEL 品系的 内禀增长率 （r）、周限增长率 （λ）和净增值率 （R ）均显著升高，而总繁殖率 （GRR） 0 和平均世代时间（T）显著缩短。 进一步分析了 Bis-UNSEL/ Bis-SEL 品系生殖指标的差异，发现Bis-SEL 品系的产 卵前期和产卵历期长于 Bis-UNSEL 品系，两品系的残卵量、产出率、幼虫孵化率、雌 成虫体重、精巢占比、卵巢管指数变化趋势一致，但差异不显著；Bis-UNSEL 品系雌 成虫卵巢比重、寿命、潜在产卵量均低于 Bis-SEL 品系。通过 qRT-PCR 分析发现 Bis-UNSEL 和Bis-SEL 品系Vg 和VgR 基因均在蛹期就开始表达，且表达水平随雌成 虫卵巢发育呈先升后降趋势，在羽化36h 时达到峰值，且Vg 基因在Bis-UNSEL 品系中 的相对表达量显著高于Bis-SEL 品系，而VgR 基因在两品系间的表达量则相反。Vg 和 VgR 蛋白在 Bis-UNSEL 和 Bis-SEL 品系体内含量变化趋势与其基因表达量一致， Bis-UNSEL 品系Vg 和VgR 蛋白含量均低于Bis-SEL 品系。 利用转录组测序分析了 Bis-UNSEL 品系和Bis-SEL 品系的差异基因，每个品系设 置三次样本重复，得到46.61Gb Clean Data，共发掘633 个新基因。分析得到20 个差异显 著表达基因，13 个为上调基因，7 个为下调基因。差异基因分子功能分别被注释为 3 类：生物学过程 （Biological Process ）、细胞位置 （Cellular Component ）和分子功能 （Molecular Function ）。 聚类分析发现，除Bis-UNSEL 品系中newgene3304 和newgene5403 ，Bis-SEL 品系 中gene1466 和gene3097 基因外，其余Bis-UNSEL 和Bis-SEL 品系的差异基因表