生物化学：第01章蛋白质的结构与功能（12医本）.pptVIP

若蛋白质变性程度较轻，去除变性因素后，蛋白质仍可恢复或部分恢复其原有的构象和功能，称为复性(renaturation) 。 在一定条件下，蛋白疏水侧链暴露在外，肽链融会相互缠绕继而聚集，因而从溶液中析出。 变性的蛋白质易于沉淀，有时蛋白质发生沉淀，但并不变性。 蛋白质变性后的絮状物加热可变成比较坚固的凝块，此凝块不易再溶于强酸和强碱中。 蛋白质沉淀 蛋白质的凝固作用(protein coagulation) 四、蛋白质在紫外光谱区有特征性吸收峰 由于蛋白质分子中含有共轭双键的酪氨酸和色氨酸，因此在280nm波长处有特征性吸收峰。蛋白质的OD280与其浓度呈正比关系，因此可作蛋白质定量测定。 蛋白质经水解后产生的氨基酸也可发生茚三酮反应。 蛋白质和多肽分子中肽键在稀碱溶液中与硫酸铜共热，呈现紫色或红色，此反应称为双缩脲反应，双缩脲反应可用来检测蛋白质水解程度。 五、应用蛋白质呈色反应可测定蛋白质溶液含量 茚三酮反应(ninhydrin reaction) 双缩脲反应(biuret reaction) 第五节 蛋白质的分离纯化与结构分析The Separation and Purification and Structure Analysis of Protein 一、透析及超滤法可去除蛋白质 溶液中的小分子化合物 二、丙酮沉淀、盐析及免疫沉淀 是常用的蛋白质沉淀方法 三、利用荷电性质可用电泳法将 蛋白质分离 四、应用相分配或亲和原理可将 蛋白质进行层析分离 五、利用蛋白质颗粒沉降行为不 同可进行超速离心分离 氨基酸序列的测定 根据核酸推演蛋白质中的氨基酸序列 六、应用化学或反向遗传学方法可分析多肽链的氨基酸序列 二级结构测定 三级结构测定 七、应用物理学、生物信息学原理可进行蛋白质空间结构测定 目前已知一级结构的蛋白质数量已相当可观，并且还以更快的速度增加。 国际互联网有若干重要的蛋白质数据库，例如 EMBL（European Molecular Biology Laboratory Data Library） Genbank （Genetic Sequence Databank） PIR（Protein Identification Resource Sequence Database） 收集了大量最新的蛋白质一级结构及其他资料，为蛋白质结构与功能的深入研究提供了便利。 蛋白质分子中某一段肽链的局部空间结构，即该段肽链主链骨架原子的相对空间位置，不涉及氨基酸残基侧链的构象 。 (所谓肽链主链骨架原子即N（氨基氮）、 Cα（α-碳原子）和Co（羰基碳）3个原子依次重复排列) (关键词:主链、肽段、局部) 什么是？ 二级结构的主要化学键— 氢键 二级结构的基本单位— 肽单元 二、多肽链的局部主链构象为蛋白质 二级结构 二级结构的基础—肽单元(peptide unit) 的说明： C?1和C?2为反式(trans)构型,O和H也是反式构型。 肽键键长0.132nm ＜0.149 nm 0.127 nm ＜ Cα与羰基Co和N相连的单键能自由旋转，角度为ψ 、 ? ,该旋转角度决定了相邻2肽单元的相对空间位置。 部分双键性质,不能自由旋转。 C?1、C、O、N、H、C?2 6个原子在同一平面,称为肽键平面。 （一）参与肽键形成的6个原子在同一平面上 20世纪30年代末，L.Pauling和Corey应用X-射线技术研究氨基酸和寡肽晶体结构获得键长、角数据，推导出肽的构想，提出： 相邻2肽单元（肽键平面）的相对空间位置 Cα1 O H N Co ψ 酰胺平面-1 酰胺平面-2 O H N Co Cα3 Cα2 R H ? ?-螺旋 (? -helix) ?-折叠 (?-pleated sheet) ?-转角 (?-turn) 无规卷曲 (random coil) （二）α-螺旋结构是常见的蛋白质二级结构 蛋白质二级结构 ①外观：右手螺旋（顺）。 ?-螺旋结构要点： ?-螺旋 ( ? -helix ) ②螺距：3.6个氨基酸、0.54nm。 ③维持因素：氢键。 ④R基团的位置：螺旋外侧， R基团影响?-螺旋的形成。 ①肽段折纸状、锯齿状，相对伸展。 ?-折叠结构要点： ?-折叠 ( ?-pleated sheet ) ②几个肽段顺向平行、反向平行0.70nm。 ③维持因素：氢键。 ④R基团的位置：锯齿的上下方。 4个氨基酸残基 第二个常为脯氨酸 180?回折 氢键维持 ?-转角结构要点： 无规卷曲： ?-转角和无规卷曲 无规卷曲是用来阐述没有确定规律性的那部分肽链结构。 （五）模体是具有特殊功能的超二级结构 在许多蛋白质分子中，可发现二个或三