sds-page测定蛋白质相对分子质量实验报告.pdfVIP

SDS－PAGE 测定蛋白质相对分子质量 一、前言 聚丙烯酰胺凝胶电泳 聚丙烯酰胺凝胶电泳，简称 PAGE，是以聚丙烯酰胺凝胶作为支 持介质的一种常用电泳技术。聚丙烯酰胺凝胶由单体丙烯酰胺和甲叉 双丙烯酰胺聚合而成，聚合过程由自由基催化完成。催化聚合的常用 方法有两种:化学聚合法和光聚合法。化学聚合以过硫酸铵(APS)为催 化剂，以四甲基乙二胺(TEMED)为加速剂。在聚合过程中，TEMED 催 化过硫酸铵产生自由基，后者引发丙烯酰胺单体聚合，同时甲叉双丙 烯酰胺与丙烯酰胺链间产生甲叉键交联，从而形成三维网状结构。 PAGE 根据其有无浓缩效应，分为连续系统和不连续系统两大类， 连续系统电泳体系中缓冲液 pH 值及凝胶浓度相同，带电颗粒在电场 作用下，主要靠电荷和分子筛效应。不连续系统中由于缓冲液离子成 分，pH，凝胶浓度及电位梯度的不连续性，带电颗粒在电场中泳动 不仅有电荷效应，分子筛效应，还具有浓缩效应，因而其分离条带清 晰度及分辨率均较前者佳。不连续体系由电极缓冲液、浓缩胶及分离 胶所组成。浓缩胶是由 AP 催化聚合而成的大孔胶，凝胶缓冲液为 pH6.7 的 Tris-HCl 。分离胶是由 AP 催化聚合而成的小孔胶，凝胶缓 冲液为 pH8.9 Tris-HCl。电极缓冲液是 pH8.3 Tris