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Lipo2000 瞬时转染细胞步骤 Stealth™ RNAi or siRNA Transfection 24 孔板为例，其余规格的转染见表 1 1 中板，细胞密度为 30-50%适宜。 注意：根据转染后细胞检测时间长短决定细胞中板密度，如果转染后需要长时间 后检测，则细胞中板密度适当降低，已避免细胞过度生长导致存活降低。 2 第二天（24-36 小时后）每个孔转染方式如下： A 将 20pmol siRNA 溶于 50ul Opti-mem 无血清培养基中。 B 将 1ul lipo2000 溶于 50ul Opti-mem 无血清培养基中，混匀室温放置 5min。 C 将 A B 两管混合，放置 20min。 3转染期间，将 24 孔板培养基换成无血清培养基，每孔 400ul。将C 管 mix 加入 24 孔板对应孔中，4-6 小时候换成有血清培养基。 Plasmid DNA Transfection DNA(ug):lipo 2000(ul)=1:2-3 转染时细胞密度越高，转染效率，表达效率也越高，并且可以降低细胞毒性。 1 中板。 5 贴壁细胞：0.5-2X10 cells/well，第二天待细胞密度达到 70-80%时转染 悬浮细胞：4-8X105 cells/well，中板后随即转染。 2 转染。 A 将 0.8ug DNA 溶于 50ul Opti-mem 无血清培养基中。 B 将 2ul lipo2000 溶于 50ul Opti-mem 无血清培养基中，混匀室温放置 5min。 C 将 A B 两管混合，放置 20min。 转染期间，将 24 孔板培养基换成无血清培养基，每孔 400ul。将C 管 mix 加入 24 孔板对应孔中，4-6 小时候换成有血清培养基。 Table 1. Culture Shared reagents DNA transfection RNAi transfection 中板密度* Culture Surf. Vol. of Vol. of DNA Lipofec RNA Lipofec vessel area per plating dilution tamine tamine well medium medium ™2000 ™2000 1000-10000 96-well 0.3cm2 100ul 2X25ul 0.2ug 0.5ul 5pmol 0.25ul cell/well 0.5-2X105 24-well 2cm2 500ul 2X50ul 0.8ug 2.0ul 20pmol 1.0ul cell/well 1-3X105 12-well 4cm2 1ml 2X100ul 1.6ug 4.0ul 40pmol 2.0ul cell/well 2-3X105 6-well 10cm2 2ml 2X250ul 4.0ug** 10ul 100pmol 5ul cell/well (35mm) 8-10X105 60mm 20cm2 4ml 2X0.5ml 8.0ug*** 20ul 200pmol 10ul cell/dish 2-3X106 10cm 60cm2 15ml 2X1.5ml 24ug 60ul 600pmol 30ul cell/dish *：中板密度根据不同细胞不同实验有所不同，这里仅提的数据仅供参考 **：6 孔板细胞质粒转染量 1-2ug 足以。 ***：6cm dish 细胞质粒转染量 4-6ug 足以。 Opti-MEM® I 减血清培养基是 EMEM 的改良型,其中使用了 HEPES 和碳酸氢钠进行缓 冲,并添加次黄嘌呤、胸苷、丙酮酸钠、L-谷