液泡H~+-ATPase H亚基基因家族鉴定和ZmVHA-H2基因功能研究.pdf

目 录 中文摘 要I ABSTRACTIII 第一章引言1 + 1.1 液泡H -ATPase 的研究进展1 + 1.1.1 液泡H -ATPase 的组成结构与功能1 1.1.2V-ATPase 的各亚基的分子结构与功能2 1.1.3V-ATPase亚基基因在植物中的克隆及其生理功能4 + 1.2 液泡H -ATPaseH亚基在植物中的研究进展5 1.2.1V-ATPaseH亚基的分子结构5 1.2.2V-ATPaseH亚基的生理功能5 1.2 研究目的、意义及技术路线6 1.2.1 研究目的及意义6 1.2.2 研究的技术路线6 第二章 VHA-H基因在主要作物中的基因家族的鉴定及分析8 2.1 材料与方法8 2.1.1 主要作物中VHA-H基因的鉴定8 2.1.2 系统进化及motif 分析8 2.1.3 基因结构分析8 2.1.4 VHA-H家族基因的剪切变异体分析9 2.1.5 VHA-H基因家族的启动子元件分析9 2.2 结果与分析9 2.2.1 VHA-H家族基因的鉴定9 2.2.2 VHA-H基因家族的进化及motif 分析12 2.2.3 VHA-H家族基因的结构分析15 2.2.4 VHA-H家族基因的剪切变异体分析16 2.2.5 VHA-H基因家族的启动子元件分析19 2.3 讨论20 第三章 ZmVHA-H2 基因的克隆及表达模式分析22 3.1 材料与方法22 3.1.1 实验材料22 3.1.2主要试剂22 3.1.3 玉米叶片总RNA 的提取和cDNA 第一链的合成22 3.1.4ZmVHA-H2 基因的克隆24 3.1.5 克隆载体转化细菌25 3.1.6 启动子的克隆25 3.1.7 荧光定量PCR26 3.2 结果与分析29 3.2.1ZmVHA-H2 基因的获得29 3.2.2ZmVHA-H2 基因5’上游序列P -ZmVHA-H2 的获得30 2204 3.2.3ZmVHA-H2 基因的启动子元件分析31 3.2.4ZmVHA-H2 对盐胁迫的表达分析35 3.2.5PEG胁迫下的表达变化35 3.2.6 低磷胁迫下的表达变化36 3.3 讨论37 第四章 ZmVHA-H2 基因的功能分析38 4.1 材料与方法38 4.1.1 实验材料38 4.1.2 主要试剂38 4.1.3 构建过表达载体38 4.1.4 获得纯系转基因拟南芥40 4.1.5 转基因拟南芥的特性鉴定41 4.2 结果与分析42 4.2.1 纯系转基因拟南芥T 代获得42 3