白腐菌SQ01锰过氧化物酶对合成染料的脱色及异源表达.pdf

目 录 中文摘 要I ABSTRACTIII 第一章文献综述1 1.1 白腐菌及其胞外酶1 1.1.1 白腐菌1 1.1.2 白腐菌胞外酶系1 1.2染料2 1.2.1染料废水2 1.2.2染料废水的脱色研究2 1.3锰过氧化物酶对染料的脱色研究3 1.4锰过氧化物酶异源表达的研究3 1.5本研究的目的和意义4 1.6参考文献5 第二章白腐菌SQ01锰过氧化物酶对合成染料的生物脱色9 2.1 材料9 2.1.1 菌株及产酶条件9 2.1.2 主要试剂和仪器9 2.2 方法10 2.2.1 锰过氧化物酶的分离纯化及酶活测定10 2.2.2 染料脱色体系及脱色率10 2.2.3 单因素实验10 2.2.4Box-Benhnken 实验设计10 2.2.5 锰过氧化物酶对天青A 染色棉织布的漂白11 2.3 结果11 2.3.1MnP 脱色偶氮染料的单因素实验11 2.3.2 响应面法优化脱色条件13 2.3.3MnP对天青A 染色棉织布的漂白脱色17 2.4 讨论17 2.5 小结18 2.6 参考文献18 第三章白腐菌SQ01锰过氧化物同工酶基因的生物信息学分析20 3.1材料20 3.1.1 菌株及培养基20 3.1.2主要试剂及仪器21 3.2方法21 3.2.1 白腐菌Trametessp.SQ01转录组提取及测序21 3.2.2MnP 同工酶基因碱基分布、氨基酸组成、理化性质分析21 3.2.3MnP 同工酶系统发育、跨膜区、亲疏水性分析21 3.2.4MnP 同工酶亚细胞定位、信号肽预测及保守结构域分析21 3.3 结果与讨论21 3.3.1锰过氧化物酶基因序列分析21 3.3.2MnP 同工酶一级结构——氨基酸组成分析22 3.3.3MnP 同工酶分子量与理论等电点23 3.3.4MnP 同工酶系统发育分析24 3.3.5MnP 同工酶二级结构蛋白质跨膜区分析25 3.3.6MnP 同工酶亲疏水性分析25 3.3.7MnP 同工酶的亚细胞定位27 3.3.8MnP 同工酶信号肽分析28 3.3.9MnP 同工酶保守结构域预测29 3.4 小结30 3.5参考文献30 第四章白腐菌SQ01锰过氧化物酶的异源表达32 4.1 材料32 4.1.1 菌株、质粒和培养基32 4.1.2 主要试剂和仪器32 4.2 方法33 4.2.1 引物设计33 4.2.2 目的基因mnp 的扩增33 4.2.3 重组质粒pMAL-p2x-mnp 的构建及鉴定34 4.2.4 重组蛋白的诱导表达、纯化及活性测定34 4.2.5MBP-MnP 融合蛋白的切割及活性测定34 4.2.6 重组质粒pSKPssMT 的构建及鉴定34 4.2.7 里氏木霉Tu6 原生质体的制备35 4.3 结果35 4.3.1mnp 基因序列的扩增35 4.3.2 用