甘蓝型油菜菌核病抗性基因BnTNLR1功能研究.pdf

目 录 中文摘 要I ABSTRACTIII 第一章 文献综述1 1.1植物抗病分子机理1 1.1.1PTI途径研究概况1 1.1.2ETI途径研究概况2 1.2 植物NBS-LRR 抗病基因家族研究进展2 1.2.1NBS-LRR类基因分类2 1.2.2NBS-LRR蛋白各结构域结构与功能3 TIR/CC结构域功能3 NBS结构域功能3 LRR结构域功能4 1.2.3NBS-LRR作用机制研究进展4 1.3分子水平防御机制5 1.3.1 水杨酸信号通路防御途径5 1.3.2 茉莉酸信号通路防御途径6 1.3.3 乙烯信号通路防御途径7 1.4CRISPR/Cas9基因编辑技术在油菜中的应用8 1.5 研究目的意义和研究内容9 1.5.1 研究目的意义9 1.5.2 研究内容9 第二章 BnTNLR1 基因的诱导表达及基因编辑植株的鉴定11 2.1 实验材料11 2.1.1 植物材料11 2.1.2 实验菌株及载体11 2.1.3 实验试剂11 2.1.4 实验仪器12 2.2 实验方法12 2.2.1 核盘菌对BnTNLR1 基因的诱导表达分析12 油菜叶片核盘菌接种12 油菜叶片RNA 的提取12 RNA 反转录成cDNA13 BnTNLR1 基因qRT-PCR检测14 2.2.2BnTNLR1 基因突变体鉴定14 pRGEB31-Cas9-BnTNLR1 质粒的转化14 使用花粉介导转化法将pRGEB31-Cas9-BnTNLR1 质粒转入油菜 中15 植物培养15 植物基因组DNA 的提取（CTAB 法）15 油菜叶片RNA 的提取16 RNA 反转录成cDNA16 BnTNLR1 突变体检测16 2.3 实验结果17 2.3.1BnTNLR1 基因核盘菌诱导表达分析17 2.3.2 甘蓝型油菜结实数统计18 2.3.3 油菜转基因植株的鉴定 18 2.3.4 油菜BnTNLR1 基因突变体植株的鉴定19 2.4 讨论21 第三章 BnTNLR1 基因参与油菜抗菌核病防卫响应23 3.1 实验材料及试剂23 3.1.1 实验材料23 3.1.2 实验试剂及仪器23 3.2 实验方法24 3.2.1 油菜叶片接种菌丝块24 3.2.2 SOD CAT 24 超氧化物歧化酶（ ）、过氧化氢酶（ ）活性测定 3.2.3 油菜叶片RNA 的提取24 3.2.4RNA反转录成cDNA24 3.2.5 抗病相关基因qRT-PCR 分析24 3.3 实验结果25