《传代培养及细胞计数》.pptVIP

传代培养及细胞计数 实验目的 掌握传代培养的一般方法和步骤以及培养过程中的无菌操作技术。 熟悉培养细胞的观察方法。 学习血球计数板的计数方法。 实验原理 细胞在培养皿长成致密单层后，已基本上饱和，为使细胞能继续生长，同时也将细胞数量扩大，就必须进行传代（再培养）。 传代培养也是一种将细胞种保存下去的方法。同时也是利用培养细胞进行各种实验的必经过程。悬浮型细胞直接分皿就可以，而贴壁细胞需经消化后才能分皿。 实验用品 仪器：培养箱（调整至37℃）、培养皿、超净工作台、倒置相差显微镜。 材料：卵巢癌细胞HO-8910。 试剂：1640培养基（含血清10%）、0.25%胰蛋白酶、75%消毒酒精。 实验步骤 实验前将无血清培养基和含血清培养基分装并进行温育（37℃）。 以温度计实际显示温度为准！ 实验步骤 将长满细胞的培养瓶中原来的培养液弃去。 实验步骤 用不含血清1640培养基冲洗细胞。 实验步骤 将无血清培养基吸出，加入0.25％胰蛋白酶溶液1ml，使细胞都浸入溶液中。 实验步骤 消化30-40s后，弃去胰酶，加入含血清1640培养基2ml，终止消化，并充分吹打。吹打后将悬浮起来的细胞转移到15ml离心管中，1000rpm离心5min。 实验步骤 离心后，弃上清，加含血清1640重悬，混匀，取50ul用于细胞计数。 实验步骤 血球计数板的计数原理 实验步骤 根据细胞计数的结果，用含血清的培养基调整细胞浓度到1X105个/ml。分至两个培养皿中，做好标记，继续培养。 实验完毕，将培养基瓶口迅速过酒精灯火焰消毒，拧紧后，封口膜密封。拿出超净台，放入冰箱。 实验后，请将超净工作台内擦拭干净，酒精喷洒消毒，并将酒精擦干净，打开紫外灯灭菌。用过的离心管和血球计数板须清洗干净。 各个实验小组的同学负责将垃圾带走，值日生打扫实验室卫生。 实验步骤：9、实验后的整理工作 实验报告 试述传代培养的步骤和注意事项，并指出哪些是关键步骤。 传代培养时要注意严格的无菌操作，并防止细胞之间的交叉污染。 酶解消化要适度，消化过度会对细胞造成损害，消化不够则难于将细胞解离下来。 传代后第2-3天观察细胞生长情况，了解细胞是否健康生长：健康细胞的形态饱满，折光性好。 掌握好代传代时机：健康生长的细胞生长致密，即将铺满瓶底时，即可传代。