大鼠(rat)25羟基维生素d3(25(oh)d3)-newa.pdfVIP

本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断 分离。 大鼠（Rat ）25 羟基维生素 D3 （25(OH)D3 ） 2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心 30 分钟取上清。 ELISA 检测试剂盒 3. 细胞上清液：3000 转离心 10 分钟去除颗粒和聚合物。 使用说明书 4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心 10 分钟 检测原理 取上清。 试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA ）。往预 5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于 先包被25 羟基维生素D3 （25(OH)D3 ）抗体的包被微孔中，依次加入 -20 ℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。 标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物 自备物品 TMB 显色，TMB 在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下 1. 酶标仪（450nm ） 转 化 成 最 终 的 黄 色 。 颜 色 的 深 浅 和 样 品 中 的25 羟 基 维生 素D3 2. 高精度加样器及枪头：0.5-10uL 、2-20uL 、20-200uL 、200-1000uL （25(OH)D3 ）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 3. 37 ℃恒温箱 值），计算样品浓度。 操作注意事项 样品收集、处理及保存方法 1. 试剂盒保存在 2-8 ℃，使用前室温平衡 20 分钟。从冰箱取出的 1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞 浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解 刺激，收集血液后，3000 转离心 10 分钟将血清和红细胞迅速小心地 后再使用。 2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。 冲液加 19 份的蒸馏水。 3. 浓度为 0 的 S0 号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明 洗板方法 书操作时样本已经稀释 5 倍，最终结果乘以 5 才是样本实际浓度。 1. 手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置 1min 后甩尽 4. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。 孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板5 次。 5. 所有液体组分使用前充分摇匀。 2. 自动洗板机：每孔注入洗液350 μL ，浸泡 1min ，洗板 5 次。 试剂盒组成 操作步骤 名称 96 孔配置 48 孔配置 备注 1. 从室温平衡 20min 后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封 微孔酶标板 12 孔×8 条 12 孔×4 条 无 袋密封放回 4 ℃。 标准品 0.3mL*6 管 0.3mL*6 管 无 样本稀释液 6mL 3mL 无 2. 设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品 50 μ 检测抗体-HRP 10mL 5mL 无 20×洗涤缓冲液 25mL 15mL 按说明书进行稀释 L ； 底物 A 6mL 3mL 无