拟南芥总RNA提取流程图.docVIP

实验一、拟南芥总RNA的提取 植物组织匀浆处理: 将50-100mg样品置于液氮中研磨成粉末，加入1ml TRIzol，使之充分混匀，室温下静置5min 加入220μl氯仿，充分振荡混匀，静置3min （以下要格外小心，防止RNA降解） 6℃，11,800g，离心15min； 再次抽提，取650μl上清，加130μl氯仿。充分振荡，静置3min 6℃，11,800g，离心15min 离心期间可先加500μl的异戊醇，离心完后吸取上清（约500μl） 上下颠倒几次，混匀，室温下静置10min 6℃，11800g，离心10min 弃上清，加入1ml 75%的乙醇，充分洗涤沉淀 6℃，7000g，离心5min 弃上清。离心30s，将残余液体除去室温下干燥，加200μl DEPC，20μl NaAC，660 μl无水乙醇，混匀后，-80静置1hr以上 6℃，11800g，离心20min 弃上清，离心30s，将残余液体除去晾干，加10μl DEPC水，冰上静置10 min，弹匀溶解 吸取0.5ul的RNA样品+1μl 10x loarding buffer+0.1μl EB+8.5μl DEPC水 用1%的琼脂糖凝胶电泳检测RNA的质量 所用试剂： 1、Trizol配方： 400ml 200ml 饱和酚 152ml 76ml 硫氰酸按 12.1792g 6.0896g 异硫氰酸胍 37.8112g 18.9056g NaAC(3M,PH 5.0) 13.36ml 6.68ml 甘油 20ml 10ml DEPC水 2、氯仿 3、异丙醇 4、乙醇 200ml NaAC(3M,PH 5.0)配制：分子量82.03 称取49.38 g NaAC，加100多ml DEPC水,加冰醋酸调PH值（约20ml左右） 边定容边条PH值，加水会使PH值下降。