《细胞骨架染色》.pptVIP

细胞骨架染色;一.考马斯亮蓝R250染色法观察微丝;真核细胞胞质中有错综复杂的纤维网,称为细胞骨架。根据纤维的直径分为微丝,微管和中间纤维。此外,还散布着一些比微丝还细的纤维。 本实验观察的是由微丝平行排列组成的纤维束,在动物细胞里称作”应力纤维” . 应力纤维在体外培养的贴壁细胞中尤其发达。一般当细胞充分铺展时,经考马斯亮蓝R250染色,可看到沿细胞长轴伸展的粗大纤维束,此即应力纤维。;仪器、材料和试剂;实验步骤;5.PBS洗数次,滤纸吸干。 6.用0.2％考马斯亮蓝R250染片子1h。然后小心用水冲洗,蒸馏水冲洗,空气中略干燥。 7.普通光学显微镜下用40×物镜或油镜观察。应力纤维成深蓝色。;注意事项;实验报告;思考题;二.甲基罗丹明标记的鬼笔环肽染色法观察微丝;鬼笔环肽是双环杆肽,与微丝有强烈的亲和作用，能使F-actin稳定。用荧光燃料甲基罗丹明标记的鬼笔环肽可以清晰地显示细胞中的微丝。;（一）仪器荧光显微镜 （二）材料 平皿,直径30mm小染缸,载玻片,盖玻片,铝盒,体外培养的贴壁细胞如B-cap细胞。 （三）试剂 细胞培养基,3.7％甲醛-PEMD,磷酸缓冲液(PBS,PH7.4),丙酮,甲基罗丹明-鬼笔环肽染液,甘油-PBS(9:1)。