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实验二 微生物接种技术
一、目的
微生物接种技术就是在灭菌条件下,用接种工具(针、环)从一支原菌种中挑取少许菌体,接入到另一支新的培养基上进扩大培养的技术。
了解学习灭菌操作技术;掌握斜面接种技术。
二、原理
接种就是在灭菌条件下,用接种工具(针、环)(如图3-1)从一支原菌种中挑取少许菌体,接入到另一支新的培养基上进扩大培养的技术。接种就是在灭菌条件下,用接种工具(针、环)从一支原菌种中挑取少许菌体,接入到另一支新的培养基上进扩大培养的技术。
我们要想得到大量的菌种,适应生产,科研和教学要求,就要进行微生物的接种,扩大菌种数量。接种因使用不同容器、不同的培养基,达到不同的目的,而有不同的接种方法,但是它们的基本要求是相同的。通常接种都应在空气经过消毒灭菌过的“接种室”、或接种箱或超净工作台内进行。
三、材料、试剂与器具
材料 苏云金杆菌斜面菌种,牛肉膏蛋白胨斜面培养基。
试剂 75%酒精或1:50的新法尔天水溶液。
超净工作台,接种针(环),接种工具(如图3-1)、酒精灯等。
图
图3-1 接种工具
接种环;B.接种针;C.接种钩;
D.接种铲;E.F.玻璃涂布器
四、操作步骤
(一)准备工作
1.接种或接种室使用前半天先擦洗干净,然后每立方米体积用5~10毫升福尔马林盛在容器中加热熏蒸或者是用1/10的福尔马林重量的高锰酸钾加到盛有福尔马林的容器中,不用加热,亦可进行熏蒸;也可用5%的石炭酸喷务灭菌;用紫外灯照射20~30min。也可达到灭菌的目的。应注意,要把接种时要所需的用具(如接种针(环),酒精灯等)及培养基放入接种箱(室)一起灭菌消毒,但是菌种不能放入,以免死。超净工作要预先通风,紫外线照射30min方可使用。
2.进入接种室前先把手洗净,再用75%酒精或新洁尔灭擦两手,菌种试管表面同样要用酒精或新洁尔灭抹擦后才放入接种室(箱内)。
(二)接种技术
1、斜面菌种接种技术(从斜面培养基上的菌种接种至另一新的斜面培养基上的方法)。
(1)准备工作就绪后,点然酒精灯。
(2)将菌种和斜面培养基的两支试管用大拇指和其他四指握在左手中,使中指拉于两试管之间的部分,斜面向上,并使它们拉于水平位置,也可将试管放在左手掌中,用手指托住试管。
(3)先将棉塞用右手拧转松动,便以接种时拔出。
(4)右手拿接种环(拿的方法就和拿钢笔一样),在火焰上将环的部分烧红灭菌。环以上凡是在接种时可能进入试管的部分,均应用火烧过(如图3-2)。
以下操作都要把试管口靠近火焰旁进行。
(5)用右手小指、无名指和手掌拔掉棉塞(如图3-2)。
(6)用火焰灼烧管口,灼烧时应不断转动试管口(靠手腕的动作,使试管口沾染的小量菌得以烧死)。(如图3-2)。
(7)将烧过的接种针(环)触动没有长菌的培养基部分,使其冷却,以免烧死被接种的菌体,然后轻轻接触菌体,取出少许,慢慢将接种针(环)抽出试管(如图3-2)。
(8)迅速将接种针(环)在火焰旁无菌区伸进另一试管,在培养基斜面上轻轻划线,在上面接细菌,划线时要由底部划到顶部,由上而上,划线可划之字形,或划几条直线,但都不要把培养基划破,也不要使菌种沾污管壁(如图3-2)。
(9)将接种针(环)抽出,灼烧试管口,并在火焰旁将棉塞塞上。塞棉塞时,不要用试管去迎棉塞,以免试管在运动时纳入不洁空气(如图3-2)。
(10)把针(环)在火焰上再灼红灭菌,放下接种钟(环)后,再腾出手来将塞塞紧。(如图3-2)。
(11)全部培养基接种完毕后,要将试管斜面培养基包扎好,并标明姓名、时间和菌种名称;整理好接种室(箱)的台面,搞好清洁卫生。
2、液体接种技术(由斜面菌接入液体培养基内或液体菌种接入液体培养基)
(1)准备工作和操作方法与前相同,但可使试管向上略斜,以免培养液流出。
(2)将取得菌种的接种环送入液体培养基时,可使环在液体表面与管壁接触的部分轻轻摩擦。接种后塞棉塞,将试管在手掌中轻轻摇动,使菌体在培养基中分散开来。
(3)由液体菌种接种液体培养基时,接种用无菌滴管或移液管,接种量通常为培养液体积的1/10。无菌操作的注意事项与前相同,只是移液管不同于接种针,系由玻璃做成,它不能在火焰上灼烧,接种前在火焰上迅速通过一两次即可。
3、穿刺接种技术(深层柱形固体培养基的接种技术)(如图3-3)
(1)取两支新鲜半固体牛肉膏蛋白胨深层柱状培养基,做好标记(写上菌种名、接种日期和接种人等)。
(2)接种的方法是,用接种针沾取少量待接菌种,然后从柱状培养基的表面中心穿入其底部(但不要穿透),然后沿原刺入路线抽出接种针,注意接种针不要移动。
以上接好种的材料置于30℃下培养24~48h。
图3-3 穿刺接种技术
五、注意事项
1、菌种取出后,接种针(环)不要通过火焰、以免烧死菌体。
2、斜面接种时,不要使接种针(环)的碰到
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