04 何灿-教师资格-生物学科（高中）-精讲班-第一部分第四版块（33-41讲）.pdfVIP

教师资格 生物学科知识与教学能力 （高中 ） 精讲班 授课教师 ：何灿 四 现代生物科技 第一章 基因工程 一、基因工程 基因工程是指按照人们的意愿 ，进行严格的设计 ，并 通过体外DNA重组和转基因等技术 ，赋予生物以新的遗 传特性 ，从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和 生物产品。 由于基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工 的 ，因此又叫做DNA重组技术。 第一章 基因工程 1、基因工程又叫做基因拼接技术或DNA重组技术。 2、基本工具 ： “分子手术刀” ：限制性核酸内切酶 “分子缝合针” ：DNA连接酶 基因进入受体细胞的载体 运载体 第一章 基因工程 3、基本操作步骤 ： 1、目的基因的获取 2、基因表达载体的构建 （核心 ） 3、将 目的基因导入受体细胞 4、目的基因的检测与鉴定 第一章 基因工程 操作环境 生物体外 操作对象 基因 操作水平 ＤＮＡ分子水平 基本过程 剪切、拼接、导入、表达 结　　果 人类需要的基因产物 实质 ：基因重组 第一章 基因工程 二、基因工程的工具 1.限制性核酸内切酶 A A T T 来源 ：主要从原核细胞分离 作用 ：一种限制性内切酶只能识别双链DNA分子的某种特定 的核苷酸序列 ，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间 的磷酸二酯键断开 （切割DNA分子 ） 形成平未端 （SmaI ）及黏性未端 （EcoRI ） 第一章 基因工程 2.DNA连接酶—— “分子缝合针” 1)、种类 ：E·coli DNA连接酶 （黏性末端 ） T DNA连接酶 （黏性末端和平末端 ） 4 2)、作用部位 ：磷酸二酯键 DNA连接酶可把平未端或黏性末端之间的缝隙 “缝合” 起来 ，即相当于把梯子两边的扶手的断口连接起来 ，这 样一个重组DNA分子就形成了。 第一章 基因工程 3.分子运载车——运载体 （1 ） 作用 ：将 目的基因送入受体细胞 （2 ） 具备的条件 ：a.能 自我复制.b.具有一个或多个酶切 位点.c.有标记基因.d.对受体细胞无害. （3 ）种类 ：质粒、噬菌体、动植物病毒 质粒——细菌拟核DNA之外结构简单、能 自主复制的很 小的环状DNA分子。 第一章 基因工程 三、基本操作步骤 （一 ）目的基因的提取 目的基因 ：主要是指编码蛋白质的结构基因。 获取方法 ： 1、从基因文库中获取 目的基因 2、人工合成法 ：化学方法合成DNA片段 （反转录法、直 接合成法 ） 第一章 基因工程 3、 PCR反应扩增DNA 原理 ：DNA复制 过程 ：加热DNA解链 冷却引物结合到互补DNA链 互 补链合成 条件 ：耐高温DNA聚合酶 第一章 基因工程 四、基因文库的构建 ： 提取某种生物的全部DNA 某种生物的mRNA 用适当的 限制酶切 逆转录 一定大小的DNA片段 单链互补DNA 将DNA片段 与载体连接 双链cDNA片段 导入受体菌中储存