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Western blot实验标准方法
【细胞收集】
(如果收完细胞要马上跑胶的,也可以在培养皿中直接加细胞裂解液裂解细胞)
贴壁生长的细胞先弃培养液,胰酶消化,加全培终止消化,将细胞吹打下来移到EP管中,1500rpm 离心3min,吸掉上清中的培养液, 再加PBS洗一次细胞,离心,吸掉多余的PBS, 保存在-20°C。
【细胞裂解】
所有操作均在冰上进行!!!(温度过高,蛋白质会发生自身酶解导致变性)
准备工作: 提前制冰,预冷离心机,提前开水浴箱(100℃),配置细胞裂解液(RIPA, 或Lysis buffer 加入4%的蛋白酶抑制剂??or 1% PMSF )。
镜下观察细胞是否长满,
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