十字花科蔬菜丝核菌根腐病的病原生物学及检测技术研究.pdfVIP

摘 要 十字花科蔬菜是人们日常生活中消费和需求的主要蔬菜种类之一。由于其生长周期短，茬口 密集、周年生产导致土壤连作障碍问题不断出现。近年来，丝核菌 （Rhizoctonia spp. ）引起的根 腐病成为限制其生产的主要因素之一，导致蔬菜产量降低，严重时可绝收。目前，国内尚未登记 过防治十字花科蔬菜丝核菌根腐病的药剂，这就使得田间防治更为困难。本文综合了形态学鉴定、 致病性测定和分子生物学方法，对十字花科蔬菜丝核菌根腐病进行了病原生物学、病原菌的检测 技术以及防治药剂的研究。主要结果如下： 1. 明确了我国部分地区十字花科蔬菜丝核菌包括4 个融合群，且存在生物学特征差异。本研 究在河北、天津、北京、内蒙古、甘肃、江苏、山西等 16 个省份31 个地区的十字花科蔬菜主产 区进行了病样调查和采集，共分离保存278 株丝核菌，寄主主要有白菜、油菜、芥菜、萝卜和甘 蓝等9 种。经形态学鉴定、致病性测定和菌株DNA 的ITS 、TEF-1α 序列分析，共鉴定出4 个融 合群，分别为AG-2-1、AG-1-IB 、AG-4HGII 和AG-A ，其中AG-2-1 的分离频率最高，占62%。 2. 建立了立枯丝核菌的多重荧光定量 PCR 检测技术，可同时检测 AG-2-1、AG-1-IB 和 AG-4HGII 这3 个融合群。根据十字花科蔬菜立枯丝核菌3 个主要融合群的TEF-1α 和LSU 基因 序列，分别设计了特异性的引物和探针：Rhs2F/R/P 、Rhs 1BF/R/P 和Rhs4GF/R/P ，构建携带目标 -7 基因的重组标准质粒A 、B 和 H ，建立了多重荧光定量PCR 标准曲线，该体系灵敏度达到 10 ng/μL 。人工接种白菜后第2 d ，就能检测到病原菌；接种后第3 d，根部开始表现出症状，在第6 d 病原菌检测量最大；田间发病植株和根际土壤中均能检测到有荧光信号的病原菌。 3. 筛选出了丝核菌根腐病的高效防治药剂异菌脲和菌核净。室内生物活性测定表明14 种供 试药剂，对丝核菌菌丝生长能起到不同程度的抑制作用。50%异菌脲WP 和40%菌核净WP 的抑 制效果均较强，EC50 分别为0.24 μg/mL 和5.61 μg/mL；25%嘧菌酯SC 对丝核菌的抑制效果最差， EC50 为1532.81 μg/mL。温室苗期药效结果显示，50%异菌脲WP 和40%菌核净WP 防效均较高， 分别为93.10%和93.97%；30%恶霉灵AS 防治效果最差，为27.59% 。其它药剂都对白菜丝核菌 根腐病起到了一定的防治效果。 关键词：十字花科蔬菜，丝核菌根腐病，多重荧光定量PCR ，防治药剂筛选 I Abstract Cruciferous vegetables are one of the main vegetable plants that people consumed and demanded in daily life. Because of the short growth period, dense crops and annual production, leading to serious continuous cropping obstacles. In recent years, Rhizoctonia root rot have become one of the important factors restricting production, which lead to the decreased of the crop yield and quality, and even more no yields. At present, there are no registered fungicides to control Rhizoctonia root rot of cruciferous vegetables, which makes more difficult to control this