口蹄疫病毒VP3蛋白诱导凋亡和自噬增强病毒致病性的机制.pdfVIP

摘 要 小RNA 病毒包括人类和动物的多种重要病原体。病毒感染导致的病理变化通常是由病毒直 接杀死宿主细胞的能力引起的，小RNA 病毒通过长期进化能够通过控制宿主细胞死亡为它们的 复制和传播创造有利条件。在本研究中，我们发现小RNA 病毒科中口蹄疫病毒（Foot-and-mouth disease virus，FMDV ）、脊髓灰质炎病毒（Poliovirus，PV ）及塞内卡病毒（Seneca valley virus， SVA ）的结构蛋白VP3 具有诱导细胞凋亡和自噬的作用，但其机制及其生物学意义不清楚，为了 阐明其机制和生物学意义，开展了如下研究： （一）口蹄疫病毒VP3 蛋白能够诱导凋亡和自噬，Gly129 为功能位点。 FMDV 小RNA 病毒科的一种重要的模式病毒，研究表明其能在感染动物病变皮肤组织中诱 导强烈的细胞凋亡和自噬，并且以凋亡为主。我们首先筛选了FMDV 的VP3 诱导凋亡的关键位 点。结果显示Gly129 突变为Ala 显著降低了FMDV 的VP3 诱导凋亡和自噬的程度。通过结构预 测模拟发现Gly129 位于FMDV-VP3 无规卷曲结构的band 区，该无规卷曲结构极易与周围环境 中的蛋白发生相互作用，Gly129 的突变有可能改变这些相互作用。巧合的是，Gly 在其他小RNA 病毒（包括PV 、EV71、CV 以及SVA）的相似位置上是保守的位点。 （二）VP3 能够与p53 互作并激活p53 与Bad 依赖的线粒体凋亡通路。 进一步机制研究表明，FMDV 的VP3 能促进p53 从核内转运到胞质，然后VP3 在胞质与p53 发生直接的相互作用，并促进其磷酸化。活化的p53 在线粒体上与Bad 发生相互作用并激活Bcl- 2 家族介导的凋亡和LC3 依赖性自噬。FMDV 的VP3 的单个残基Gly129 在细胞凋亡、自噬诱导 以及与p53 的相互作用中起着至关重要的作用。通过反向遗传技术拯救了Gly129 突变和未突变 的重组毒rVP3-129/FMDV 和 rVP3/FMDV ，体内体外病毒感染实验比较发现，Gly129 突变显著 降低了FMDV 在体内外促进p53 核质转运以及与p53 发生共定位的能力，在病毒水平上证实了 VP3 的功能和上述机制。 （三）口蹄疫病毒VP3 通过诱导凋亡和自噬增强病毒致病性。 通过体外和体内感染和致病试验，结果发现Gly129 突变后FMDV 在体内外诱导凋亡和自噬 的程度显著降低；同时，病毒的滴度以及对组织损伤的程度显著降低，表明VP3 诱导的细胞死亡 是促进FMDV 致病性的直接因素。我们还发现VP3 诱导的细胞死亡主要发生在病毒感染的中后 期，当Gly129 突变后，重组病毒的复制水平显著降低，说明VP3 诱导的凋亡和自噬是病毒在感 染后期促进病毒释放和复制的一个途径。 综上所述，FMDV 的VP3 通过Gly129 与p53 发生互作，并诱导的凋亡和自噬，是病毒复制 和致病性的主要机理。并且由于Gly129 在小RNA 病毒中的位置相对保守，其诱导细胞死亡的功 能可能也是保守的。该研究拓展了口蹄疫病毒致病机制的认知，为口蹄疫及小 RNA 病毒的研究 和防控提供了新的理论和思路。 关键词：口蹄疫病毒VP3；细胞凋亡；自噬；p53；致病性 I Abstract Picornavirus is a kind of unencapsulated single stranded RNA virus, including a variety of important pathogens in humans and animals, such as foot-and-mouth disease virus, enterovirus, hepatitis virus, heart disease virus. Programmed cell death (PCD) is a kind of cell death triggered by internal or external stimulation and regulated by a series of genes, which plays a