马链球菌马亚种感染模型的建立及其噬菌体的分离鉴定.pdfVIP

摘 要 腺疫 （Strangles）是由马链球菌马亚种 （Streptococcus equisubspeciesequi，S.equi）感染马、 驴、骡等马属动物引起的急性接触性传染病。腺疫是我国三类动物疫病，在我国尚没有详细的疫 情报道，本课题组对马、驴腺疫的发病情况进行了调查，发现随着我国马、驴产业发展、马属动 物流通的增加，腺疫发病率逐年升高，已成为危害马、驴养殖业的主要传染病之一。由于研究起 步晚和缺乏应有的重视，目前尚缺乏预防和治疗腺疫的有效手段。国内外腺疫疫苗的研究结果显 示，尚没有有效的疫苗能提供持久的保护力，免疫保护期均不超过6个月，且存在疫苗免疫的安 全性问题。对腺疫的治疗方面仍以使用抗生素为主，这不可避免的将产生耐药菌增多、动物免疫 机能降低等问题。 为了研发腺疫的疫苗和治疗制品，本研究通过鉴定获得一株生物学特征明确的S.equi （HLJ2018），利用该菌株初步建立了小鼠和马的感染模型，并筛选到了1株该菌株的噬菌体 （SP2019），该噬菌体为上世纪八十年代以来世界上首次报道的S.equi 噬菌体。具体工作如下： 马链球菌马亚种临床分离株生物学特性研究及感染模型的建立：本试验从黑龙江某马场分离 腺疫病原菌，对该菌进行了革兰氏染色镜检形态观察、生化鉴定、seM 蛋白基因测序鉴定、16S rRNA 测序鉴定、耐药性分析、对小鼠的致病力及其脏器的影响，同时建立了有效的马感染模型， 确定了该菌株感染马的方式及感染剂量。结果表明，该病原菌为S.equi 菌株，命名为HLJ2018； HLJ2018对头孢曲松、红霉素、替考拉宁、苯唑西林、利福平比较敏感，而对多西环素、阿莫西 林、克林霉素耐药；不同剂量HLJ2018通过腹腔注射的方式感染小鼠，发现该菌株对小鼠的最小 5 完全致死剂量为1×10 CFU，小鼠解剖后，各脏器经HE 染色，发现HLJ2018主要在脾脏增殖， 11 导致脾脏结构消失，对心脏、肝脏、肺脏、肾脏、脑等部位影响较小；以50 10 CFU/匹的剂量 × 通过喂服的方式感染试验马，能够达到100%的发病率，与对照组相比，试验马出现典型腺疫症状， 即下颌部肿胀、化脓破溃。 S.equi 噬菌体的生物学特性研究及其用于腺疫治疗：以HLJ2018为宿主菌，经过对数千份环 境样品的筛选，成功分离到马链球菌马亚种噬菌体，命名为SP2019。对该噬菌体进行了电镜形 态观察、最佳感染复数测定、宿主菌裂解谱以及噬菌体治疗效果的初步研究。结果表明，SP2019 属于短尾噬菌体科，最佳感染复数为0.01；不耐高温；对酸碱比较敏感；有较强的裂解能力，能 裂解不同地区分离到的马链球菌马亚种；腹腔注射SP2019 治疗受感染的小鼠，不能提高小鼠存 活率；通过给患马静脉注射SP2019 悬液，与对照组比较，能够明显促进下颌肿胀消退。 本试验完成了对S.equi 菌株HLJ2018 的生物学特征研究，利用该菌株制备的菌悬液感染小鼠 和马匹，初步建立了马链球菌马亚种感染模型，为腺疫的疫苗、治疗等研究奠定了基础。同时分 离到针对HLJ2018 的噬菌体SP2019，这是自1977年美国分离到1株马链球菌马亚种噬菌体后， 近四十年唯一报道的S.equi 噬菌体。完成了其基本生物学特性研究，用该噬菌体治疗患腺疫马匹， 初见成效。噬菌体SP2019 的发现，不仅开拓了腺疫治疗的新方向，也为研究马链球菌马亚种进 化、宿主特异性等提供了重要工具。本项研究对腺疫的疫苗、治疗等研究具有重要的意义。 关键词：腺疫，马链球菌马亚种，感染，噬菌体，噬菌体治疗 I Abstract Stranglesis an acute infectious disease causedby Streptococcus equi subspeciesequi (S.equi), horses, donkeys, mules are susceptible. Strangles was class