生物化学：DNA 的限制性内切酶酶切分析.pptVIP

MCIS 技术交流 Microsoft DNA 的限制性内切酶酶切分析 1. 酶切 组分 加入体积 （2人一组） ddH2O 7ul 10×buffer EcoRI 2ul 质粒DNA 8ul EcoRI 3ul 盖紧，混匀，稍离心，37 ℃水浴反应1h 限制性内切酶(Restriction Endonuclease, RE): 由细菌自身产生，能识别双链DNA分子中特定的碱基顺序，以内切方式水解核酸中的磷酸二酯键，产生粘性末端或平头末端。 实验原理 EcoR I的作用模式图: 产生5 ?突出粘性末端 **********GAATTC******** **********CTTAAG******** 5 ? 3 ? 5 ? 3 ? EcoR I *********G *********C T T A A 5 ? 3 ? 3 ? 5 ? —OH — P A A T T C********* G********* 5 ? 3 ? 3 ? 5 ?