MicroPulser电穿孔仪的操作与维护规程.docVIP

Bio-Rad MicroPulser 电穿孔仪的操作及维护规程 1、功能介绍 选择预设程序 MicroPulser 电穿孔仪预设了常用的微生物电击程序，包括 5 个细菌和 5 个真菌电击程序。如下： Mnemonic Cuvette Voltage Time Organism (KV) Number of pulses (cm) constant(ms) Ec1 1 Ec2 1 Bacteria StA 1 Agr 1 Ec3 1 Sc2 1 Sc4 1 Fungi ShS 1 Dic 2 Pic 1 按 Settings 键选择 Bacteria ， Fungi 和 Manual 设置。当 Fungi 旁的 LED 灯亮时，预存的真菌转化 程序即被调出， 按 Raise和 Lower  键显示出不同的真菌转化程序。  电击的参数自动按显示的程序设定。  同样 的，选择 Bacteria 程序相同。 选择手动模式 A. 改变电压 按  Settings  键，当 Manual 旁的  LED  灯亮时， 显示屏显示电压值  (单位  kV) 。按 Raise 和 Lower  键在 kV to kV 之间改变电压设置。如果仪器刚刚打开，显示值为 。 B. 截短脉冲 当Manual 旁的 LED 灯亮时， 同时按 Raise 和 Lower 键 LED 机时的默认设置为标准的指数衰减脉冲，衰减过程并不被截短，显示为后只松开 Lower 键，显示数字为截短的脉冲持续时间，单位为毫秒（  屏显示 “t —，”表示为脉冲选择了时间。“——”。同时按 Raise 和 Lower ms），从 1 毫秒开始以毫秒为增量一  开 键 直到 4 毫秒。 限定脉冲时间在 1-4 毫秒之间。 同时按 Raise 和 Lower 键后只松开 Raise 键，可以调整脉冲时间到更短。 脉冲功能 按Pulse 键到电容充电至设定电压； PLS 显示在显示屏上。脉冲完成后会发出一声响，如果是一次设 置好的多重脉冲则在整个脉冲过程中每次脉冲后发出一声响， PLS 一直在显示屏上显示。要想手动多重脉 冲，则可以在一次脉冲完成发出一声响后，再次按 Pulse 键。 如果实验中发出比较低程度的声响，伴随着 Arc 在显示器上显示，预防和淬火电弧系统启动，脉冲被中止。 电击杯通常被击穿，如果样品电阻太小则电击杯仍可能被击穿。 测 量 按 Measurements 键可以点亮 Actual kV ， LED 显示最后一次脉冲试验的实际电压（单位 仪器刚刚开机并且没有使用过，显示器显示 。再次按 Measurements 键可以点亮 Time ms LED 脉冲持续时间，如果仪器刚刚开机并且没有使用过，显示器显示 。  kV ）。如果，显示上次 常规操作 接外接电源，打开仪器右侧黑色开关钮。 选择要转化的微生物体（ 、、） 设定电压和电流，如：对 DH5a ：，6mS。 在放入电转杯前，先点击右侧黄色的电击钮，检查参数是否设定正确。 电转杯中加入感受态细胞和 DNA 的混合物，擦干点转杯外部的水，放入电击槽中的正确位置，进行电击。 取出电转杯，关闭电源。 注意事项 电转仪要放置在平稳的台面上，并且保证在电击过程中电击槽要水平。 电转仪的电压可在 200-3000V 间选择，精度为 10V ；时间可在 ms 范围内调节，精度为 ms。 检查显示的时间常数和实际电压，正确后再进行电击。 电转杯使用后， 用去离子水冲洗并超声清洗， 保存在 75%乙醇中。 下一次使用前预先在 100% 乙醇中浸泡 1h， 晾干并紫外照射。