基因工程：高等动物基因工程.pptVIP

转基因鱼 采用受精卵的DNA显微注射技术转移基因 鱼卵受精后不易察觉，所以转基因通常将转基因DNA注射到受精卵的胞质中或处于四细胞发育阶段的胚胎中。 鱼卵的发育是外生型的，无需胚胎的移植操作。 含有鲑鱼生长激素cDNA、鳕鱼抗冻蛋白基因所属启动子以及polyA化信号序列的重组分子被注射到大西洋鲑鱼卵中，构建出的转基因鱼生长迅速且体重大幅度增加。 进一步的研究是将抗病、耐环境压力以及其他优异的生物性状引入温热带鱼种体内。 just a joke 六 基 因 治 疗 基因治疗的基本战略思想 肿瘤的基因治疗 囊性纤维变性症的基因治疗 杜兴肌营养不良症的基因治疗 重度联合免疫缺陷症的基因治疗 糖尿病的基因治疗战略 骨髓细胞的转基因研究 基因治疗的副反应及其对策 基因治疗的基本战略思想 基因治疗是指将正常有功能的基因取代病人细胞中的缺陷基因从而达到治疗分子病的目的。 基因治疗的基本概念 分子病可分为遗传性分子病和非遗传性分子病两大类，前者的病变基因位于生殖细胞中，具有遗传倾向性，如血友病等；后者的病变基因则定位于体细胞内，如大多数的癌症及病毒感染疾病。 根据病变基因的数目，分子病又可分成单基因病和多基因病两种，像家族性高胆固醇血症、囊状纤维变性症和神经性肌肉病变等均由单基因缺陷所致，而癌症、艾滋病、糖尿病、心脑血管疾病以及神经变性综合症等则由多基因缺陷引发。 目前已知的分子病共有4000余种，其中遗传性和非遗传性分子病各占一半。 基因治疗的基本内容 基因诊断：RPLE、PCR扩增、SSCP、人类基因库搜寻法 基因分离：利用DNA重组技术克隆、鉴定、扩增、纯化用于治疗的正常基因，并与特异性整合序列和基因表达调控元件进行体外重组操作，安装在合适的载体上。载体包括病毒？和非病毒两类。 基因转移 性细胞：伦理 体细胞 体内疗法：脏器 体外疗法：流动系统 基因转移的基本方式 体内疗法的基因转移方式 感染缺陷型重组病毒颗粒的直接注射，组织、器官、血液； 重组DNA分子直接注射横纹肌肉，骨骼肌、心肌； 由呼吸道吸入气溶胶（重组病毒，脂质体），呼吸道上皮细胞； 基因枪轰击转移，器官、组织或细胞； 电穿孔导入，皮肤组织。 体外疗法的基因转移方式：病毒转染，腺病毒和逆转录病毒； 治疗基因能稳定表达 检测不出具有复制力的野生型病毒颗粒 病毒DNA重组分子不能整合在靶细胞的要害部位 基因治疗的分子机制 正常基因 从健康人体内分离克隆，或通过同源重组方式置换病变基因，或依靠表达产物弥补病变基因的非功能性蛋白的生理作用。通常用于矫正各种基因缺陷型的遗传病，如血友病、地中海贫血病以及由腺奇脱氨酶（ADA）基因缺陷所致的重度联合免疫缺陷症等。 反义基因 用于治疗病毒感染或肿瘤这两大类获得性分子病。反义基因的体内表达产物(反义RNA)或与病毒的激活因子编码基因互补(如艾滋病毒HIV)，或与肿瘤基因的mRNA互补(如食道癌癌基因c-myc)，从而阻断其表达。 自杀基因 在病毒、细菌和真菌中存在的一些酶能将细胞中一些原本无毒的代谢物转化为毒性化合物，而这些酶在动物体内是不存在的。如果将它们转入肿瘤细胞，再辅以原代谢物或药物，就能杀灭癌细胞。因此这类酶称为自杀酶，相应的基因则为自杀基因。 自杀基因疗法由三个要素组成: ①能编码一种酶的基因(“自杀”基 因), 其编码的酶能将无毒的前药转变为活性毒物,引起靶细胞死亡; ② 转移自杀基因至靶细胞的载体,常采用基因工程改造的逆转录病毒、腺病毒和腺病毒相关性病毒; ③对机体无毒或仅有微毒,而在自杀基因编码的酶作用下, 能转化为活性细胞毒性药物的前药。 ? β-gs基因-------无毒的苦杏仁苷变得有毒； 细胞色素P450-------无毒的CPA代谢为4-羟CPA。 旁观者效应 HSV-tk/GCV系统中，本身无毒性的GCV,在HSV-tk 作用下,变成GCV单磷酸盐(GCV-MP)， 再经内源性细胞激酶作用,迅速转化为其二磷酸-(GCV-DP)和三磷酸盐(GCV-TP),后者对增殖中的靶细胞具有高度毒性。 CD/5-Fc系统中，CD系由大肠杆菌和某些霉菌表达的一种酶，可将5-Fc脱氨,生成5-氟 尿嘧啶(5-Fu)，进而引起靶细胞死亡。 肿瘤的免疫治疗 1. 增强肿瘤细胞的免疫原性 CTL+MHC I（干扰素）+IL-2 2. 提高人体的免疫机能 肿瘤浸润细胞（TIL）导入肿瘤坏死因子（TNF) 直接导入细胞因子INF基因的重组质粒+γ-胶质瘤抗体 表达细胞因子减轻放化疗的副作用（G-CSF促进造血细胞的生成） 3.改变癌基因和抑癌基因的表达特性 反义RNA