09胶体金标记流程.docVIP

. 胶体金标记流程 （一） 原理免疫胶体金技术是以胶体金作为示踪标志物应用于抗原抗体的一种新型的免疫标记技）在还原剂如柠檬酸三钠、白磷、抗坏血酸、枸橼酸钠、HAuCl术。胶体金是由氯金酸（4称并由于静电作用成为一种稳定的胶体状态，鞣酸等作用下，聚合成为特定大小的金颗粒， 为胶体金。由于这胶体金在弱碱环境下带负电荷，可与蛋白质分子的正电荷基团形成牢固的结合， 种结合是静电结合，所以不影响蛋白质的生物特性。、SPA、PHA胶体金除了与蛋白质结合以外，还可以与许多其它生物大分子结合，如等。根据胶体金的一些物理性状，如高电子密度、颗粒大小、形状及颜色反应，加上ConA病理学和细胞生结合物的免疫和生物学特性，因而使胶体金广泛地应用于免疫学、组织学、 物学等领域。主要利用了金颗粒具有高电子密度(Immunogold labelling techique) 免疫金标记技术当这些标记物在相应的配体处大的特性，在金标蛋白结合处，在显微镜下可见黑褐色颗粒，这量聚集时，肉眼可见红色或粉红色斑点，因而用于定性或半定量的快速免疫检测方法中， 一反应也可以通过银颗粒的沉积被放大，称之为免疫金银染色。 器皿及试剂的处理（二） 玻璃器皿的清洁1.如果玻璃器皿内制备胶体金的成功与失败除试剂因素以外玻璃器皿清洁是非常关键的一步。无色颜色微红、不干净或者有灰尘落入就会干扰胶体金颗粒的生成，形成的颗粒大小不一，我们的经验是制备胶体金的所有玻璃器皿先用自来水把玻璃器皿上的灰尘流或混浊不透明。）浸10000ml2500ml，加蒸馏水至水冲洗干净，加入清洁液（重铬酸钾1000g,加入浓硫酸次，自来水冲洗掉洗洁剂，43～泡24h，自来水洗净清洁液，然后每个玻璃器皿用洗洁剂洗通过此方法的处次，烤箱干燥后备用。再用双蒸水把每个器皿洗3～4用蒸馏水洗3～4次，用同等大而直接制备胶体金。也可用已经制备的胶体金溶液，理玻璃器皿不需要硅化处理，小颗粒的金溶液去包被所用的玻璃器皿的表面，然后弃去，再用双蒸水洗净，即可使用，这 样效果更好，因为减少了金颗粒的吸附作用。 2.试剂的配制要求 1）所有配制试剂的容器均按以上要求酸处理洗净，配制试剂用双蒸馏水或三蒸馏水。（的水溶液。1%将lg的氯化金一次溶解于双蒸水中配成（）氯化金HAuCl）水溶液的配制：（24 年左右，仍保持稳定。4℃冰箱内保存长达几个月至1放在 胶体金的制备（三））是主要还原材料，常用还原剂Cl．制备方法胶体金的制备多采用还原法。氯金酸（HAu14根据还原剂类型以及还原作用的强弱，硼氢化钠等。抗坏血酸、白磷、有柠檬酸三钠、鞣酸、 150nm不等的胶体金。可以制备0.8nm～ 柠檬酸盐还原法。具体操作方法如下：最常用的制备方法为 加热至沸。0.01％水溶液，取100ml先配制成（1）将HAuC14 O）水溶液。HCO?2HNa2（）搅动下准确加入一定量的1％柠檬酸三钠（26573。此时可观察到淡黄色的氯金酸水溶液在柠檬酸钠加入后很快变15min（3）继续加热煮沸 3min。2灰色，续而转成黑色，随后逐渐稳定成红色。全过程约～ ）冷却至室温后用蒸馏水恢复至原体积。（4金颗粒的大小取决于制备时加入的柠檬酸三钠的147nm16用此法可制备～粒径的胶体金。. . 种不同粒径胶体金时柠檬酸三钠的用量。1列举制备4量。表表1 四种粒径胶体金的制备及特性金粒直％柠檬酸三钠加入胶体金特性呈manml518nm 2.00 16 橙色 522nm 橙色24.5 1.50 525nm 41 1.00 红色 535nm0.70 71.5 紫色 注意事项： （1）易潮解，应干燥、避光保存。 （2）氯金酸对金属有强烈的腐蚀性，因此在配制氯金酸水溶液时，不应使用金属药匙称量氯金酸。 （3）用于制备胶体金的蒸馏水应是双蒸馏水或三蒸馏水，或者是高质量的去离子水（18M）。 （4）用以制备胶体金的玻璃容器必须是绝对清洁的，用前应先经酸洗并用蒸馏水冲净。最好是经硅化处理的，硅化方法可用5％二氯甲硅烷的氯仿溶液浸泡数分钟，用蒸馏水冲净后干燥备用。 （5）胶体金的鉴定和保存：胶体金的制备并不难，但要制好高质量的胶体金却也并非易事。因此对每次制好的胶体金应加以检定，主要检查指标有颗粒大小，粒径的均一程度及有无凝集颗粒等。 肉眼观察是最基本也是最简单和方便的检定方法，但需要一定的经验。良好的胶体金应该是清亮透明的，若制备的胶体金混浊或液体表面有漂浮物，提示此次制备的胶体金有较多的凝集颗粒。在日光下仔细观察比较胶体金的颜色，可以粗略估计制得的金颗粒的大小。当然也可用分光光度计扫描λmax来估计金颗粒的粒径。制备的胶体金最好作电镜观察，并选一些代表性的作显微摄影，可以比较精确地测定胶体金的平均粒径。