2015版本中国药细菌内毒素检查法验证实施方案.docxVIP

记录编码： LZ-B00-TJL-2011-010-A 序号： 北京灵泽医药技术开发有限公司 一次性肠外营养输液袋 内细菌毒素检查法验证方案 编制： 李树权 日期： 2012.11.7 审核： 日期： 批准： 日期： 验证目的 为公司产品细菌内毒素检测方法提供依据。 验证依据 《中华人民共和国药典》 2010 年版 第二部 附录Ⅺ E 细菌内毒素检查法 验证条件 无菌操作间（万级） 验证准备 4.1 试验设备 设备名称 设备编号 设备状态 内毒素检测仪 A10-2012-A-004-0 完好 鼓风式干燥箱 A10-2010-A-007-1 完好 5.2 试剂 试剂名称 来源 批号 内毒素工作品（ 10EU/ml） 湛江博康海洋生物 鲎试剂 (0.25EU/ml) 湛江博康海洋生物 内毒素检查用水 湛江博康海洋生物 120406 5.3 样品： 样品名称 规格型号 批号 数量 一次性肠外营养输液袋 PN-E-W 3500ml 2 4.4 实验前准备： 实验用具移液管（或刻度吸管、微量加样器及无热原吸头） 、凝集管（ 10mm×75mm）、三角瓶、试管、试管架、洗耳球、封口膜、时钟、 75%酒精棉、剪刀、砂轮、耐热器皿须经 180℃烘烤 120min。若使用塑料器具， 如微孔板和与微量加样器配套的吸头等，应选用标明无内毒素并且对实验无干扰的器械。 2) 使用塑料器械，如微孔板和与微量加样器配套的吸头等，置 30%双氧水中浸泡 4 小时，再用细菌内毒素检查用水充分冲洗后 60℃烘干备用。或用一次性无热源吸头。 样品制备（供试液溶液） 将 20ml 内毒素检查用水注入到一次性肠外营养输液袋内， 37℃孵育 60min。作为供 试品溶液。 鲎试剂灵敏度复核 鲎试剂灵敏度复核的目的不仅是考察鲎试剂的灵敏度是否准确，也是考查检验 人员操作方法是否正确及实验条件是否符合规定。因此要求实验室在使用一批新的 鲎试剂进行供试品干扰实验或供试品细菌内毒素检查前必须进行鲎试剂灵敏度复核 实验。 6.1 实验操作 6.1.1 细菌内毒素标准溶液的制备： 1) 取细菌内毒素国家标准品或工作标准品一支， 轻弹瓶壁， 使粉末落入瓶底， 然后 用砂轮在瓶颈上部轻轻划痕， 75％酒精棉球擦拭后启开，启开过程中应防止玻璃屑 落入瓶内； 按照标准品说明书， 加入规定量的细菌内毒素检查用水溶解其内容物， 用封口膜将瓶口封严，置旋涡混合器上混合 15min。然后进行稀释，制备成 4个浓度的细菌内毒素标准溶液 , 即 2.0 λ、 1.0 λ、 0.5 λ、 0.25 λ（λ为所复核的鲎试剂的标示灵敏度），每稀释一步均应在旋涡混合器上混合 30秒钟（详细过程请参见标准品使用说明书）。 6.1.2 待复核鲎试剂的准备： 取规格为 0.1mL/ 支的鲎试剂 18支，轻弹瓶壁使粉末落入瓶底，用砂轮在瓶颈轻 轻划痕， 75％酒精棉球擦拭后启开备用。 每支加入 0.1mL检查用水溶解， 轻轻转动瓶 壁，使内容物充分溶解，避免产生气泡。若待复核鲎试剂的规格不是 0.1mL/ 支时， 取若干支按其标示量加入检查用水复溶，充分溶解后将鲎试剂溶液混和在一起，然 后每 0.1mL分装到 10mm× 75mm凝集管中，要求至少分装 18管备用。 6.1.3 加样 将已充分溶解的待复核鲎试剂 18支（管）放在试管架上，排成 5列，其中 4列4 支（管），每支分别加入 0.1mL 2.0 λ、 1.0 λ、 0.5 λ、 0.25 λ的内毒素标准溶液； 1列2支（管），每支分别加入 0.1mL检查用水。 6.1.4 加样结束后，将鲎试剂用封口膜封口，轻轻振动混匀，避免产生气泡，连同 试管架放入（37± 1）℃水浴或适宜恒温器中， 试管架保持水平状态， 保温 (60 ±2)min 。 6.1.5 观察并记录结果。将试管架从水浴或适宜恒温器中轻轻取出，避免振动，将 每管拿出缓缓倒转 180°观察， 若管内形成凝胶， 并且凝胶不变形， 不从管壁滑脱者 为阳性，记录为（＋）；未形成凝胶或形成的凝胶不坚实、变形并从管壁滑脱者为 阴性，记录为（ - ）。保温和拿取试管过程应避免受到振动造成假阴性结果。 6.1.6 实验结果计算 如最大浓度 2.0 λ 4管均为阳性， 最低浓度 0.25 λ4管均为阴性， 阴性对照为阴性时实验为有效，按下式计算反应终点浓度的几何平均值即为鲎试剂灵敏度的复核结果（λ c）： c=antilg( ∑ X/4 ) ； 式中 X 为反应终点浓度的对数值（ lg ） , 反应终点浓度是系列递减的内毒素标准溶 液中最后一个呈阳性结果的浓度。 6.1.7 结果判断 当λc 在0.5 λ～2.0 λ(包括 0.5 λ和2.0 λ)时判定该批鲎试剂灵敏度复核合格， 可用