分子生物学：实验1-2 植物总RNA的提取.pptxVIP

实验1-2 植物总RNA的提取;1.了解真核生物基因组RNA提取的一般原理。 2.掌握Trizol提取RNA的方法和步骤。 3.了解RNA纯度的检测。 ;实验原理;试剂配制;植物RNA; Northern杂交，纯化mRNA以用于体外翻译或建立cDNA文库，RT-PCR及RFLP等分子生物学研究，都需要高质量的RNA。因此，从植物组织中提取纯度高、完整性好的RNA是顺利进行上述研究的关键一步。;RNA提取;RNase酶非常稳定，耐高温，是导致RNA降解最主要的物质。用常规的高温高压蒸气灭菌方法和蛋白抑制剂都不能使RNase完全失活，RNase广泛存在于人的皮肤上。 RNA提取的关键是控制RNase的污染，而手是污染的主要来源之一 ;DEPC（diethypyrocarbonate，焦碳酸二乙酯）和RNA酶的活性基团组氨酸的咪唑环反应而抑制酶活性，用1‰ DEPC处理可以使RNase失活（但DEPC会与Tris和DTT发生化学反应而失效），所以所有的器具均需用DEPC处理过的水冲洗。玻璃器具用180℃烘烤4h以上处理。 DEPC本身是剧毒致癌物，DEPC水需高压灭菌使DEPC失活。 ;实验步骤;实验步骤;RNA浓度和纯度检测;RNA电泳;注意事项;问题分析