基础化学 基础化学 高效液相色谱法.pptVIP

1、概述 高效液相色谱法（high performance liquid chromatography, HPLC）是20世纪六十年代末在经典液相柱色谱法的基础上引入了气相色谱的理论和技术，采用高压泵、高效固定相以及高灵敏度检测器发展而成的分离分析方法。 1、概述 经典柱色谱法流动相是在常压或低压下运行，传质速度慢，所用固定相颗粒粗，柱效低，分离时间长；色谱柱不能连续使用；样品用量大，灵敏度低；除了用于制备分离外，不能在线检测。HPLC和GC的基本理论一致，定性定量原理完全一样，均可用计算机控制色谱条件和色谱的处理程序进行在线检测。 1、概述 1、概述 流动相： GC：流动相为惰性气体做流动相，组分与流动相无亲合作用力，只与固定相作用。改变载气对柱效和分离效率影响小。 HPLC：流动相为液体 流动相种类多，性质差别大，可供选择范围广； 流动相与组分间有亲合作用力； 流动相（极性和pH值）是控制柱效和分离效率的重要因素之一。 操作条件： GC：加温操作 HPLC：室温；高压 1、概述 HPLC采用高灵敏度检测器，如紫外检测器的最小检测量可达纳克(10-9g)级、荧光检测器的灵敏度可达10-11g。 HPLC的特点：分离效率高、分析速度快、灵敏度高、色谱柱可反复使用、流动相可选择范围宽、流出组分容易收集、操作自动化、适用范围广。 采样和进样 石英窗 接色谱柱 UV 光电 倍增管 废液 1）紫外检测器 微量吸收池，光程为2-10mm, 体积约为1~10 ?L 最小检测量10-9g·ml-1 对流量和温度波动不敏感 可用于梯度洗脱。 最常用的通用型检测器 2.5 检测系统 1）紫外检测器 缺点：只能检测有紫外吸收的样品（含双键、孤对电子的物质）； 检测波长＞流动相的截止波长。 紫外检测器的类型： ① 固定波长型（已淘汰） ② 可变波长型（最常用） ③ 二极管阵列检测器（最新型） 2.5 检测系统 1 概述 2 高效液相色谱仪 3 高效液相色谱基本理论与实验技术 4 实验 第六章 高效液相色谱法 第六章 高效液相色谱法 HPLC和GC的不同点： 分析对象： GC：能气化、热稳定性好、且沸点较低的样品，占有机物的20%。 HPLC：溶解后能制成溶液的样品，不受样品挥发性和热稳定性的限制，可发析高沸点、难挥发和热不稳定的化合物、离子型化合物和高聚物乃至生物大分子等物质。占有机物的80% 1、概述 高效液相色谱（HPLC）法的主要类型 液固吸附色谱法 液液分配色谱法 键合相色谱法 离子交换色谱法 体积排阻色谱法 离子对色谱法 亲和色谱法 正相色谱法和反相色谱法。 高效液相色谱（HPLC）法的主要类型 液固吸附色谱法 原理：基于被测组分在固定相表面吸附能力不同而实现分离。 固定相：通常是活性硅胶、氧化铝、活性炭、聚乙烯、聚酰胺等固体吸附剂 。其中硅胶最常用 。 流动相：弱极性有机溶剂或非极性溶剂与极性溶剂的混合物，如正构烷烃（己烷、戊烷、庚烷等）、二氯甲烷/甲醇、乙酸乙酯/乙腈等。 应用：用于结构异构体分离和族分离，如农药异构体分离、石油中烷、烯、芳烃的分离。 缺点：容易产生不对称峰和拖尾现象。 高效液相色谱（HPLC）法的主要类型 液液分配色谱法及化学键合相色谱 1）分离原理：根据物质在两种互不相溶的液体中溶解度的不同，具有不同的分配系数。 与气液色谱一样，固定液涂渍在担体表面；与气液色谱的不同之处在于，液相色谱的流动相种类对分配系数有较大的影响 。 高效液相色谱（HPLC）法的主要类型 液液分配色谱法及化学键合相色谱 2）正相分配色谱与反相分配色谱 根据所用流动相和固定相的极性程度，将其分为正相分配色谱和反相分配色谱。 正相分配色谱：固定相的极性大于流动相的极性。它适用于极性化合物的分离。洗脱时极性小的组分先流出色谱柱。 反相分配色谱：固定相的极性小于流动相的极性。它适用于非极性化合物的分离。极性大的组分先流出色谱柱。 高效液相色谱（HPLC）法的主要类型 液液分配色谱法及化学键合相色谱 3）化学键合相色谱 将各种不同有机基团通过化学反应键合到载体表面。目前广泛使用的载体为：全多孔或薄壳型微粒硅胶。 分离机理：分配和吸附两种作用兼有。 高效液相色谱（HPLC）法的主要类型 反相键合色谱法 固定相：非极性或弱极性，常用十八烷基硅烷键合相(ODS或C18） 流动相：常用甲醇ˉ水、乙腈ˉ水 水