分子实验室、细胞实验室常用的配方.docVIP

分子实验室、 细胞实验室常用配方 2 （一） WB相关试剂及常用缓冲液 RIPA （100mI ）（最后要调 pH 为7.4 ）终浓 分子量 称取 度 Tris-HCI(pH7.4 50m 121.14 605.7mg ) M NaCI 150 58.44 876.6mg mM TritonX-100 1% 1mI 脱氧胆酸钠 1% 1g EDTA 1 mM 292.24 29.2248m 8 g SDS 0.1% 0.1g PMSF 使用时每 （100mM ） 1ml 加10ul 10%过硫酸铵溶液 AP（分装保存于 -20 度） AP粉末 1g ddH20 10ml 10％SDS（十二烷基硫酸钠）： SDS粉末 10g ddH20 定容到 100ml 2 3 注意：用磁力搅拌器搅拌不会容易起泡泡 6X 蛋白质 sample buffer Tris-HCl(1M,pH6.8) 30mL SDS 10g 甘 油 30mL DTT（ 154.25 ） 9.3g 溴 酚 蓝 0.06g dd H20 定 容至 100mL 10XPBS缓冲液的配制： NaCl 80g KCl 2g Na2HPO4 14.4g （十二水合 36g） KH2PO40 2.4g 加 800 mLddH2O,根据开始的 pH用 NaOH或 HCL调 pH到 7.4 ，调好 pH再定容到 1 升。配好后用高压蒸气灭菌后常温保存最好是在 4 度 3 4 PBST(1X) PBS(1X) 500ml Tween 20 500 μl 50×Tris- 乙酸（ TAE）缓冲液配制 1L 溶液各 成分的用量 Tris 粉末 242g 冰醋酸 57.1ml Na2EDTA·2HO 37.2g 2 1L ddH0 定容到 封闭液 脱脂奶粉 5g 叠氮钠 0.02g( 现 配现用时可不加 ) PBS 定容到 100mL 染色液( 室温) 1L 500ml 200ml 100ml 甲醇 500mL 250 100 50 乙酸 100 50 20 10 mL R250 考马斯亮蓝 0.5g 0.25 0.1 g 0.05 4 5 g g H20 400 200 80 40 mL 脱色液： ( 室温 ) 甲醇 165mL 乙酸 50 mL H20 785 mL 8.8Buffer: （调 pH至 8.8,4 度保存） 100ml 200ml Tris 18.17g 36.34g 10%SDS 4mL 8ml ddH20 定 容 至 200ml 100mL 6.8 Buffer: （调 pH至 6.8,4 度保存） 100ml 200ml Tris 6．06g 12.12g 10%SDS 4mL 8ml ddH20 定 容 至 200ml 100mL 5 6 转移缓冲液（ 10×trans buffer ）：（常温保存） 1L 2L 甘氨酸 144g 288g Tris 粉 30.3g 60.6 末 2 定容至 定容至 ddH0 1L 2L 使用时甲醇 200mL 转移缓冲液（ 10×） 100 mL ddH0 700 mL 2 电泳缓冲液（ 10×）(running buffer) ：（常温保存） 1L 2L 甘氨酸 144g 288g Tris 粉 30.3g 60.6 末 SDS 10g 20g 2 定容至 定容至 ddH0 1L 2L 10Х)TBS: （常温保存） NaCl 80.0g 6 7 Tris 粉末 24.2g ddH 20 定容至 1L TBST(1X) TBS(1X) 500ml Tween 20 500 μl Stripping buffer( 可反复利用 ) 温老师组配 方 10%SDS 10ml Β- 巯基乙醇 350 l Tris-HCI （pH6.8） 6.25ml （6.06 加到 50mL 水） 加入 ddH2O 至 50mL Stripping buffer( 可反复利用 ) 郭老师给配 方 甘氨酸 15g SDS 1g Tween20 1ml dd ddH2O 1L 作这个 buffer 洗 20min，然后用 PBST洗 3 次，再重新封闭孵抗体。 7 8 8 9 （二）细胞和细菌培养基、抗生素 LB 培养基 ( 当天灭菌后放 4 度存放 ) 1000ml 500ml 300 ml 250 ml 200 ml 氯 化 10g 5g 3g 2.5g 2g 钠 蛋 白 10g 5g 3g 2.5g 2g 胨 酵 母 5g 2.5g 1.5g 1.25g 1g 提 取 物 ddH0 定容至 定容至 定 容定容至定 容 2 1000ml 500ml 至 250ml 至 300ml 200ml LB 平板：（当天