类胡萝卜素提取动力学研究实验总结报告.pdfVIP

应用化学系本科化学实验报告 课程名称 综合化学实验 成绩评定 实验项目名称 设计实验 指导教师 实验项目类型 综合化学实验 实验地点食工楼 6 楼 633 室 班级 实验者 学号 实验时间 2012 年 4 月 18 日上午～4 月 18 日 下午 温度 13~26 ℃湿度 65~80 % 2012 年 4 月 25 日上午～4 月 25 日 下午 温度 16~23 ℃湿度 65~80 % 一、实验目的 1.掌握类胡萝卜素的定性(薄层层析法) ； 2.定量测定方法(紫外可见分光光度法) ； 二、实验原理 1. 类胡萝卜素(carotenoids)是自然界广泛存在的天然色素,包括一类碳氢化 合物(Carotenes)及它们的氧化衍生物(Xanthophylls) ，它们由 8 个类异戊二烯单位 组成。对天然类胡萝卜素进行分离纯化和结构鉴定是十分重要的基础研究工作之 一。紫外可见吸收光谱(Uv-Vis)主要产生于分子价电子在电子能级间的跃迁，它 是研究分子吸收 190~750 nm 波长范围内的吸收光谱，它不仅在有机化合物的结 构鉴定中发挥重要作用，而且依此原理建立的紫外可见分光光度法是应用最广泛 的定量分析方法之一。 2. 实验室常用的薄层色谱，其原理是利用混和物中各组分在不相混溶的两 相即流动相(展开剂)和固定相(吸附剂) 中吸附和解吸的能力的不同，也可以说在 两相中的分配不同，当混合物随流动相(展开剂)流过固定相(吸附剂)时，发生了 反复多次的吸附和解吸的过程，从而使混合物分离成两种或多种单一的纯组分。 利用萜类化合物的溶解度差异进行分离，含羟基、氧环则溶于醇，不含羟基、氧 环(多烯)则溶于石油醚。 三、试剂及器材 1. 原料，试剂 胡萝卜干粉或新鲜胡萝卜；α-和 β-胡萝卜素标准品、(95%和无水)乙醇、石 油醚(沸程 30℃ ~60℃ 、60℃~90℃) 、丙酮、乙酸乙酯、苯、甲苯、乙醚、氯仿、 正已烷、环己烷、抗坏血酸、BHT 、盐酸、氢氧化钠、硅胶层析板、氧化铝层析 板和纯水。 2. 仪器 HH-4 数显恒温水浴锅 ( 国华电器有限公司) ； BS224S 电子分析天平 (北京赛多利斯仪器系统有限公司) ； UV8000A 紫外可见分光光度计 (上海元析仪器有限公司) ； RE52CS 旋转蒸发器 (上海亚荣生化仪器厂) ； 四、操作步骤 1. 1 试剂的配制 β-胡萝卜素标准溶液：准确称 β-胡萝卜素标准物质 25.0 mg 于小烧杯中，加 入 10 mg 抗坏血酸 + 10 mg BHT 于小烧杯中，再先加入少量氯仿溶解后，再用 石油醚定容至 50ml 摇匀，即配成浓度为 500 μg/ml β-胡萝卜素标准溶液的使用 溶液，转移至棕色试剂瓶中贮存备用。 1.2 吸收曲线和标准曲线的测绘 按表 1 的比例要求移取不同体积的 500 μg/mlβ-胡萝卜素使用液，用石油醚(沸 程要与提取胡萝卜素用的石油醚相同)稀释配制成体积为 5.00ml(或 10.00ml)的一 系列不同浓度的标准溶液。取中间浓度的标准溶液，以含有相同浓度抗坏血酸 +BHT 的石油醚(沸程要与提取胡萝卜素用的石油醚相同)溶液为参比溶液，用 1 cm 比色杯，于紫外可见分光光度计在 200~800 nm 波段进行波长扫描，根据扫描 结果从而可绘得 β-胡萝卜素的吸收曲线。也可以用同样的方法绘制从胡萝卜中提 取得到的胡萝卜的吸收曲线，并比较和分析两吸收曲线的异同。根据测得的吸收 曲线可以找到 β-胡萝卜素的最大吸收波长 λmax ，并以此波长为工作波长 λw 。 用 1 cm 比色杯，在 λmax 下，以含有相同浓度的抗坏血酸+BHT 的石油醚(沸 程要与提取胡萝卜素用的石油醚相同)溶液为参比溶液，测定按表 1 配制好的一 系列标准溶液的吸光度值∆Aλmax ，然后用 Excel 软件绘制出该标准工作曲线。 表 1 β-胡萝卜素标准曲线数据 编号 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9