免疫学实验：多克隆抗体制备-ELISA.pptVIP

下载本文档

10
0
约1.26千字
约 10页
2020-11-17 发布于安徽
举报
版权申诉

免疫学实验：多克隆抗体制备-ELISA.ppt

1、原创力文档（book118）网站文档一经付费（服务费），不意味着购买了该文档的版权，仅供个人/单位学习、研究之用，不得用于商业用途，未经授权，严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等，侵权必究。。
2、本站所有内容均由合作方或网友上传，本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺！文档内容仅供研究参考，付费前请自行鉴别。如您付费，意味着您自己接受本站规则且自行承担风险，本站不退款、不进行额外附加服务；查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档，您可以点击这里二次下载。
3、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等，请点击“版权申诉”（推荐），也可以打举报电话：400-050-0827(电话支持时间：9:00-18:30)。
4、该文档为VIP文档，如果想要下载，成为VIP会员后，下载免费。
5、成为VIP后，下载本文档将扣除1次下载权益。下载后，不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
6、成为VIP后，您将拥有八大权益，权益包括：VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
7、VIP文档为合作方或网友上传，每下载1次，网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等，对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档

JLU 多克隆抗体制备-ELISA 实验材料 96孔ELISA板、移液器、镊子、离心管抗原包被液：50ug/ml OVA in 0.05M碳酸盐缓冲液，pH9.6 封闭液：5%脱脂奶粉 in PBS pH7.4 抗体稀释液：PBS pH7.4 二抗：HRP标记羊抗鼠抗体洗涤液(PBST)：0.1%Tween-20 in PBS pH7.4 显色液：0.04%OPD、0.15%H2O2 in 柠檬酸-磷酸缓冲液 pH5.0 终止液：2M硫酸取血摘取小鼠眼球，用1.5ml EP管接血。 4000rpm，离心10分钟，吸取上清（血清）待用。拉颈处死小鼠。抗血清梯度稀释 1/200 1/400 1/800 1/1600 1/3200 1/6400 1/12800 5μL 抗体(血清) 500μL 抗体稀释液 (PBS) 500μL 500μL 500μL 500μL 500μL 500μL 1 2 3 4 5 6 7 995μL 抗体稀释液（PBS）三组抗血清各做一套稀释梯度 ELISA步骤包被: OVA抗原(50ug/ml) 100μL/孔, 4 ℃过夜.（已完成）封闭：弃上清, 加入封闭液 150μL/孔, 37℃，40min. 洗涤: 加洗液200ul/孔，轻磕板1分钟，弃上清，洗三次 . 一抗: 弃上清, 加入不同稀释度的待测血清抗体100μL/孔　37℃ ，40min. 洗涤: 加洗液200ul/孔，轻磕板1分钟，弃上清，洗三次 . 酶标抗体: 加入HRP标二抗100 μL/孔37℃ 40min. 洗涤: 加洗液200ul/孔，轻磕板1分钟，弃上清，洗三次 . 显色: 加入底物100 μL/孔，避光15min 加终止液: 加2M硫酸 50 μL/孔测量: 酶标仪测定OD 490nm值. 加板方法 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10　11 12 A B C D E F G H 有佐剂组无佐剂组无抗原组 1:200 1:400 1：800 1:1600 1:3200 1:6400 1:12800 PBS（阴性对照）每个稀释度做三复孔，第四孔留空 ELISA法效价判定抗体效价: 二倍于阴性对照OD值所对应的抗体稀释度稀释度（倍） 200 400 800 1600 3200 6400 12800 阴性对照 OD值 0.4 0.35 0.3 0.25 0.2 0.15 0.11 0.08 抗体效价 ≈ 6000 数据统计方法（结果示意图）注意事项 EP管做好标记离心配平移液器操作：缓吸缓吐，用后恢复到最大量程加板：贴壁磕板：轻柔，防止交叉污染弃上清：甩板或倒扣 JLU