发酵过程控制技术 02-03谷氨酸棒杆菌斜面及平板划线培养 教学课件-谷氨酸棒杆菌斜面及平板划线培养.pptVIP

子情境：谷氨酸棒杆菌斜面及平板划线培养 假如梅花味精厂发酵生产谷氨酸，需要大量谷氨酸棒杆菌细胞，现在需要同学们进行谷氨酸棒杆菌斜面及平板划线培养，以获得斜面和平板种子，进而通过菌种扩大培养获得生产谷氨酸的大量细胞 细菌的接种方法 （一）平板划线分离法 　　在被检标本中，常混杂有多种细菌，平板划线分离法可使这多种细菌在培养基表面分散生长，各自形成菌落，以便根据菌落的形态及特征，挑选单个菌落进行纯培养。常用的平板划线分离法有以下两种： 1、连续划线分离法：此法主要用于杂菌不多的标本。用接种环取标本少许，于平板1/5处密集涂布，然后来回作曲线连续划线接种，线与线间有一定距离，划满平板为止。 2、分区划线分离法：本法适用于杂菌量较多的标本。先将标本均匀涂布于平板表面边缘一小区（第一区）内，约占平板1/5面积，再在二、三、……区依次连续划线。每划完一个区，均将接种环灭菌一次。每一区的划线均接触上一区的接种线1、2次，使菌量逐渐减少，以获得单个菌落 　　（二）斜面接种法 　　该法主要用于单个菌落的纯培养、保存菌种或观察细菌的某些特性。用灭菌的接种环取单个菌落或少许细菌，从培养基斜面底部向上划一条直线，然后从底部向上作连续曲线划线。 　　 细菌接种的基本程序 灭菌接种环 沾取标本 接种 灭菌接种环 杀灭接种环沾染的细菌，以免污染标本 杀灭接种环沾染的细菌，以免污染环境 斜面接种法 该法主要用于单个菌落的纯培养、保存菌种或观察细菌的某些特性。 （1） 贴标签 接种前在试管上贴上标签，注明菌名、 接种日期、接种人姓名等。贴在距试管口约2-3cm的位 臵。 (若用记号笔标记则不需标签)。 （2） 点燃酒精灯。 （3） 接种 用接种环将少许菌种移接到贴好标签的试管斜面上。 取菌种试管和待接种的斜面试管 灭菌接种环 斜面接种法 沾取标本 斜面接种法 接种 斜面接种法 用灭菌的接种环取单个菌落或少许细菌，从培养基斜面底部向上划一条直线，然后从底部向上作连续曲线划线，一直划到斜面顶端 接种后灭菌接种环 斜面接种法 平板划线接种法 （1）标记 在培养皿底面，用记号笔注明接种的菌名、接种 者姓名、日期等。 （2）灭菌接种环 点燃酒精灯，右手以持笔式握持接种环，并放置火焰中烧灼灭菌，先将接种环的接种丝部分置于火焰中，待金属丝烧红并蔓延至金属端，再直接烧灼金属环直至烧红，然后由金属环至金属杆方向快速通过火焰，随后再反方向通过火焰，如此2~3次。然后将接种环移开火焰，待其冷却。 灭菌接种环 平板划线接种法 （3）取菌种 左手持装有金黄色葡萄球菌或大肠杆菌菌液的试管，用持有接种环的右手手掌及小指拔取试管塞，将试管管口迅速通过火焰2~3次进行灭菌。 将已灭菌且已冷却的接种环伸入菌种管中，取一接种环的菌液，然后退出菌种管，将菌种管管口再次通过火焰2~3次灭菌，塞好试管塞，放至原来的位置。 平板划线接种法 （4）分离划线接种细菌（四区接种法） ①左手持琼脂平板培养基（将皿盖反放在桌上酒精灯附近），尽量使之直立以免空气中的细菌落入其中，并靠近火焰。右手持接种环在琼脂平板上端来回划线，涂成一细菌薄膜（约占平板的1/10），视为一区。划线时使接种环与接种平板面呈30~40度角，以腕力在平板表面行轻而快地来回滑动动作。 ②旋转琼脂平板90度，烧灼接种环，以杀灭环上的残留细菌，将接种环触及培养基表面以使其冷却。灭菌接种环通过薄膜处作连续平行划线（约占平板1/5），此视为二区。 平板划线接种法 ③旋转琼脂平板90度，灼烧接种环灭菌并使之冷却。将灭菌接种环接二区连续平行划线（约占平板1/4），此为三区。 ④旋转琼脂平板90度，接种环不必再灭菌，接三区连续平行划线，划满平板其余部分，此视为四区。 各区接种线间尽量互不交接，以达到细菌逐渐稀释的目的。 平板划线接种法 四区划线 平板划线接种法 （5）划线完毕，将琼脂平板放进皿盖，将培养皿倒放，送进37℃温箱培养。 （6）培养18~24h后将培养皿取出。观察琼脂平板表面生长的各种菌落，注意其大小、形状、边缘、表面结构、透明度、颜色等性状。 平板划线接种法 划线培养的结果