BCA法和考马斯亮蓝法测蛋白质浓度.docxVIP

精品文档 精品文档 PAGE PAGE #欢迎下载 精品文档 精品文档 PAGE PAGE #欢迎下载 分光光度法介绍 分光光度法是利用溶液中特定溶质的光吸收测定其浓度的方法， 其基本原理是根据 Lambert 和Beer定律。 Lambert 定律 当一束平行单色光垂直照射于一均匀物质溶液时， 溶液将吸收一部分光能，使光的强度减弱。 若溶液的浓度不变，则在溶液中的光程越长，光线强度的减弱也越显著。 设：入射光强度为Io，透射光强度为I , L代表光在溶液中的光程。 I0 lg =KiL I K是常数，受光线波长，溶液性质，溶液浓度影响。 Beer 定律 当一束光通过一溶液时， 光能被溶液介质吸收一部分，若光程不变，则溶液的浓度越大，光 吸收越强，透射光强度的减弱也越显著，光线减弱的比例与溶液浓度呈正比。 I0 lg=K2C K2为吸收系数，是常数。溶液对光吸收的强弱与溶液浓度 C成正比。 Lambert-Beer 定律 将以上两个定律合并： Io lg-- =KCL 入 Io I 心 令 A=lg - T= Io 贝U A=KCL=-lgT T为透光度，A为吸光度，K为消光系数 四待测样品浓度的计算 A标=KC标L A 样=KC样L 由于是同一物质及相同的光程，则： A样/A标=KC样L/KC标L=C样/C标 即：C样=（A样/A标）*C样 故已知标准溶液的浓