革兰染色教案.docVIP

南通卫生高等职业技术学校教案 教师姓名 张其斐 课程名称 微生物检验 班级 0815 授课日期 年 月 日 第 周 授课顺序 章节名称 革兰染色 教学目标 一、知识与技能目标 掌握革兰染色的操作技术 熟悉革兰染色的操作步骤和方法 了解革兰染色的原理 二、能力目标 让学生在熟练格兰染色这项操作技术，熟练使用接种环，熟练使用油镜 三、情感目标 培养学生严谨的工作态度。 教学重点和难点 重点：革兰染色的步骤和意义 难点：接种环操作手法、显微镜油镜的使用方法 教 学 资 源 教材 参考书 多媒体 实验器械 评 估 反 馈 课堂提问 课后习题 作 业 1.革兰染色的原理和方法 2.动手操作细菌革兰染色 课 后 记 （2010 /2011学年度第一学期） 教学活动及板书设计 教学过程 先用5分钟介绍革蓝染色的历史 10分钟介绍革蓝染色的原理及意义 25分钟介绍革蓝染色的操作过程及油镜使用方法 用5分钟做总结 1.革兰染色 染色方法：革兰染色法是细菌学中最广泛使用的一种鉴别染色法。1884年由丹麦医师Gram创立。方法是先将细菌用结晶紫染色，加媒染剂（增加染料和细胞的亲和力）后，用脱色剂（酒精或丙酮）脱色，再用复染剂染色。如果细菌不被脱色而保存原染液颜色者为革兰阳性菌(G＋)；如被脱色，而染上复染液的颜色者为革兰阴性菌(G-)。此染色法可将所有具有细胞壁的细菌分为两大类：革兰阳性菌和革兰阴性菌。 染色原理：现在认为细菌对革兰染色的不同反应主要是革兰阳性菌和阴性菌的细胞壁结构与化学组成不同。革兰阳性菌的细胞壁较厚，肽聚糖含量多，且交联度大，脂类含量少，经95％乙醇脱色时，肽聚糖层的孔径变小，通透性降低，与细胞结合的结晶紫与碘的复合物不易被脱掉，因此细胞仍保留初染时的颜色。而革兰阴性菌的细胞壁较薄，含有较多的类脂质，而肽聚糖的含量较少，乙醇脱色时溶解外层类脂质，增加了细胞壁的通透性，使初染的结晶紫和碘的复合物易于渗出，结果细胞被脱色，经复染后，又染上复染的颜色。 染色过程：涂片（大肠杆菌和金黄色葡萄球菌）→干燥→固定→初染（结晶紫染色1min）→媒染（碘1min）→水洗→95%乙醇脱色（1min）→复染（番红花红染色1min）→干燥→镜检（油镜） 注意事项： （1）菌种应选用对数期的菌种； （2）涂片不易过厚，涂片薄而均匀为好； （3）脱色不足或脱色过度均会造成革兰染色的假阳性或假阴性，脱色时间取决于涂片厚度、室温等 显微镜油镜的使用与保养 使用方法： （1） 在需观察部位的玻片上滴加一滴香柏油，然后慢慢转动油镜，在转换油镜时，从侧面水平注视镜头与玻片的距离，使镜头浸入油中而又不以压破载玻片为宜。 （2） 用双眼观察目镜，并慢慢转动粗调节器至出现模糊物象，然后用细调节器至物象清晰为止。 （3） 如果不出现物象或者目标不理想要重找。 （4） 油镜使用完毕，先用擦镜纸沾少许乙醇将镜头上和标本上的香柏油擦去，然后再用干擦镜纸擦干净。 注意事项： （1） 持镜时必须是右手握臂、左手托座的姿势，不可单手提取，以免零件脱落或碰撞到其它地方。 （2） 轻拿轻放，不可把显微镜放置在实验台的边缘，以免碰翻落地。 （3） 保持显微镜的清洁，光学和照明部分只能用擦镜纸擦拭，切忌口吹手抹或用布擦，机械部分用布擦拭。 （4） 水滴、酒精或其它药品切勿接触镜头和镜台，如果沾污应立即擦净。放置玻片标本时要对准通光孔中央，且不能反放玻片，防止压坏玻片或碰坏物镜。（5）（5）不要随意取下目镜，以防止尘土落入物镜，也不要任意拆卸各种零件，以防损坏。 （6） 使用完毕后，必须复原才能放回镜箱内，其步骤是：取下标本片，转动旋转器使镜头离开通光孔，下降镜台，平放反光镜，下降集光器(但不要接触反光镜)、关闭光圈，推片器回位，盖上外罩，放回实验台柜内。 （7） 最后填写使用登记表。(注：反光镜通常应垂直放，但有时因集光器没提至应有高度，镜台下降时会碰坏光圈，所以这里改为平放