高效液相色谱法原理与应用-[宣讲].pptVIP

 溶于水——排阻色谱，水为流动相 相对分子质量 ＞2000 不溶于水——排阻色谱，非水流动相 同系物——分配色谱 不溶于水 异构体——吸附色谱 样品 分子大小差异——排阻色谱 反相液一液色谱 相对分子质量 溶于水，不离解 ＜2000 排阻色谱，水为流动相 碱——阳离子交换色谱 溶于水，可离解 酸——阴离子交换色谱 溶于水， 离子与非离子—反相离子对色谱 * 精品PPT | 借鉴参考 2. 选择合适的分析方法 Analytical technique Column Mobile phase Detector Sample preparation * 精品PPT | 借鉴参考 3.分析条件的优化 流动相种类与配比 梯度 温度 流速 检测波长 进样量 * 精品PPT | 借鉴参考 二、高效液相色谱法的应用 样品测定 1．流动相比例调整：由于我国药品标准中没有规定柱的长度及填料的粒度，因此每次新开检新品种时几乎都须调整流动相（按经验，主峰一般应调至保留时间为6~15分钟为宜）。所以建议第一次检验时请少配流动相，以免浪费。弱电解质的流动相其重现性更不容易达到，请注意充分平衡柱。 * 精品PPT | 借鉴参考 样品测定 2．样品配制：①溶剂；②容器：塑料容器常含有高沸点的增塑剂，可能释放到样品液中造成污染，而且还会吸留某些药物，引起分析误差。某些药物特别是碱性药物会被玻璃容器表面吸附，影响样品中药物的定量回收，因此必要时应将玻璃容器进行硅烷化处理。 * 精品PPT | 借鉴参考 样品测定 3．记录时间：第一次测定时，应先将空白溶剂、对照品溶液及供试品溶液各进一针，并尽量收集较长时间的图谱（如30分钟以上），以便确定样品中被分析组分峰的位置、分离度、理论板数及是否还有杂质峰在较长时间内才洗脱出来，确定是否会影响主峰的测定。 * 精品PPT | 借鉴参考 样品测定 4．进样量：药品标准中常标明注入10?l，而目前多数HPLC系统采用定量环（10?l、20?l和50?l），因此应注意进样量是否一致。（可改变样液浓度） * 精品PPT | 借鉴参考 样品测定 5．计算：由于有些对照品标示含量的方式与样品标示量不同，有些是复合盐、有些含水量不同、有些是盐基不同或有些是采用有效部位标示，检验时请注意。 * 精品PPT | 借鉴参考 方法研究 1．波长选择：首先在可见紫外分光光度计上测量样品液的吸收光谱，以选择合适的测量波长，如最灵敏的测量波长并避开其它物质的干扰。从紫外光谱中还可大体知道在HPLC中的响应值，如吸收度小于0.5时，HPLC测定的面积将会很小。 2．流动相选择：尽量采用不是弱电解质的甲醇-水流动相。 * 精品PPT | 借鉴参考 HPLC主要类型及其选择 化学键合相色谱法 液固色谱法 离子对色谱法 离子色谱法 体积排阻色谱法 * 精品PPT | 借鉴参考 一、化学键合相色谱法 1.分类 正相键合相色谱法(Normal phase chromatography)：固定相的极性大于流动相的极性，适用于分离油溶性或水溶性的极性或强极性化合物 反相键合相色谱法(Reversed phase chromatography)：固定相的极性大于流动相的极性，适于分离非极性、极性和离子性化合物。应用最广泛 * 精品PPT | 借鉴参考 正相色谱法与反相色谱法比较表 ? 正相色谱法 反相色谱法 固定相