试验浊度测定分光光度计的使用.pptVIP

2020/3/3 浊度的测定 2020/3/3 实验目的 ? 掌握分光光度计法 ? 掌握浊度计法的原理与操作技术 2020/3/3 仪器 ? 容量瓶 ? 比色管 ? 浊度计 ? 分光光度计 2020/3/3 试剂 ? 硫酸肼溶液：称取 1.000g 硫酸肼溶于水，定容 至 100ml ? 六次甲基四胺溶液：称取 10.000g 六次甲基四 胺溶于水，定容至 100ml ? 标准溶液：吸取 5.00ml 硫酸肼溶液和 5.00ml 六 次甲基四胺溶液于 100ml 容量瓶总，混匀于 25 度反应 24h ，用水稀释至标线。 ? 无浊度水 2020/3/3 ? 了解分光光度计的工作原理及操作技术 2020/3/3 原理 ? 光线的本质是电磁波的一种，有不同的波长。肉眼 可见的彩色光称为可见光，波长范围在 400 ～ 750nm ：小于 400nm 的光线称为紫外光；大于 750nm 的光线称为红外光。 ? 当光线通过透明溶液介质时，其辐射的波长有一部 分被吸收，一部分透过、因此光线射出溶液之后， 部分光波减少，这种光波的吸收和透过可用于某些 物质的定性定量分析。 2020/3/3 ? 依据 Lambert-Beer （朗伯－比尔）定律 ，一束单色光通过溶液后，光波被吸收一 部分，其 吸收多少与溶液中溶质的浓度和 溶液厚度成正比 。 ? 当入射光、吸收系数 K 和溶液的光径长度 L 不变时， 吸光度 A 与溶液的浓度 C 成正 比。 具体测量时， 2020/3/3 补充知识 2020/3/3 ? 测量后的计算方法 使用 2020/3/3 ? ７２１型可见分光光度计 2020/3/3 2020/3/3 ? 双缩脲法 测定 蛋白质浓度 原 理 ? 双缩脲法是蛋白质光度分析法的一种，是利用蛋白质的双缩脲反 应而测定蛋白质含量的方法。因蛋白质含有两个以上的肽键，所 以有双缩脲反应。在碱性溶液中蛋白质与 Cu 2+ 形成紫红色络合物 ，其颜色的深浅与蛋白质的浓度成正比，而与蛋白质的分子量及 氨基酸成分无关。 ? 在一定的实验条件下，未知样品溶液与标准蛋白质溶液同时反应 ，并于 540~560nm 测定，即可以通过标准蛋白质的标准曲线求出 未知样品的蛋白质浓度。 2020/3/3 试剂 ? 一 试剂 ? 1 ．标准酪蛋白溶液（ 5mg/ml ） ? 用 0.05mol/L NaOH 溶液配制： 5g 酪蛋白加 0.05mol/L NaOH 溶液至 1 000ml 。 ? 2 ．双缩脲试剂 溶解 1.5g 硫酸铜（ CuSO4 · 5H2O ）和 6.0 g 酒 石酸钾钠（ NaKC4H4O6 · 4H2O ）于 500ml 蒸馏水中 。在搅拌下加入 10% NaOH 溶液 300ml ，用蒸馏水稀 释到 1 升，贮存在内壁涂有石蜡的瓶中，可长期保存。 ? 3 ．未知蛋白质溶液 γ– 球蛋白溶液。 2020/3/3 2020/3/3 ? 实验结果 求出待测蛋白质溶液的光密度后， 从标准曲线上查出其蛋白质浓度，按稀 释倍数求出每毫升蛋白质溶液的蛋白质 含量。