试验血液葡萄糖的测定.pptVIP

实验七 血液葡萄糖的测定 （福林 - 吴宪氏法） 一、实验 目的 1. 掌握无蛋白滤液的制备方法； 2. 掌握采用福林 - 吴宪氏法测定血液中葡萄糖的 原理； 3. 进一步熟悉分光光度计的使用。 吴宪的科学贡献 ? 吴宪的博士论文为基础的一系列工作，为 现代临床血液化学分析提供了重要的分析 手段，在国际上长时间被广泛采用。其中 关于血糖测定的方法被国际上沿用长达 70 年，为此他被誉为国际血液分析的权威。 ? 在 20 世纪 20 年代以前，测验血中的非蛋白 氮组分对病人来说是个沉重的负担，例如 仅一次尿酸测定就需耗血 25 毫升。而福 林 — 吴的新方法只需 10 毫升就足以进行包 括尿素、肌氨酸、肌氨酸酐、尿酸和糖的 测定（其中只需一滴血就能测定血糖）。 二、实验原理 磷钼酸 钼蓝 （蓝色） C 6 H 12 O 6 +2Cu(OH) 2 C 5 H 11 O 5 COOH +Cu 2 O ↓ 3Cu 2 O +3H 3 PO 4 · 2MoO 3 · 12H 2 O 6CuO +3H 3 PO 4 · Mo 2 O 3 · 12H 2 O Na 2 CO 3 ＋ H 2 O ＝ NaOH+NaHCO 3 NaOH+CuSO 4 =Cu(OH) 2 + Na 2 SO 4 碱性铜试剂 钼蓝溶液显蓝色，其蓝色的深浅与血滤液中葡 萄糖的浓度成正比，选用颜色深浅较接近于测定管 的标准管一同比色，即可求出测定管中葡萄糖的含 量。 血糖管的使用： 血糖管下部的管径较细，以避免还原生成的氧 化亚铜被空气中的氧再氧化，降低实际结果。 钨酸法 ? 原理：血液中的蛋白质在 pH 小于其等电点时，可 用钨酸来沉淀。钨酸钠与硫酸混合产生钨酸和硫 酸钠，游离的钨酸被，蛋白质吸附，形成不溶性 的钨酸蛋白而沉淀，经过滤或离心，除去沉淀即 得无蛋白的血滤液。 ? 试剂： ? ① 10% 钨酸钠溶液；② 0.333mol ／ L 硫酸溶液。 ? 仪器与器材：锥形瓶、吸管、奥氏吸管、滤纸、 漏斗或离心管及离心机。 ? 方法与步骤： ? ①取 50ml 锥形瓶 1 只，加入蒸馏水 7 份；②用奥 氏吸管吸取抗凝血 l 份，擦去管壁外血液，将吸管 插人锥形瓶中水的底部，缓慢地放出血液。放完 血液后，将吸管提高吸取上清液再吹人，反复洗 管 3 次。充分混合，使红细胞完全溶解； ③加入 1/3mol ／ L 硫酸溶液 1 份，随加随摇，充分混匀。 此时血液由鲜红变成棕色，静置 5 ～ 10min ，使 其酸化完全；④加入 10 ％钨酸钠溶液 1 份，边加 边摇，血液由透明变成凝块状。当振摇到不再产 生泡沫为止；⑤放置数分钟后用定量滤纸过滤或 离心除去沉淀，即得完全澄清的无蛋白血滤液， 供测定用。 ? 用此法制得的无蛋白血滤液为 10 倍稀释的血滤液。 即每毫升血滤液相当于全血 0.ml ，适用于葡萄糖、 非蛋白氮、尿素氮、肌酸酐和氯化物等的测定。 三、实验步骤 1 、全血无蛋白滤液的制备 抗凝血 1ml 蒸馏水 7ml 混匀 1/3mol/L 硫酸 1ml 振摇 10% 钨酸纳 1 ml 振摇 过滤 放置 5min 无蛋白血滤液 2 、按表操作 混匀，置沸水浴中煮 8min 。取出用流动自来水冷却 3min 无蛋白血滤液 蒸馏水 标准葡萄糖应用液 碱性铜试剂 空白管 标准管 测定管 1.0 2.0 1.0 1.0 - - - 1.0 - 2.0 2.0 2.0 血糖管 试剂 ml 磷钼酸试剂 2.0 2.0 2.0 1 ： 4 磷钼酸溶液 加至 混匀后放置 2 min 12.5 12.5 12.5 3 、比色测定 将各管颠倒混匀后，用空白管调零，在 420 nm 处 测定吸收度。 四、操作注意 1 、等水沸腾后，才能放入血糖管。加热要准确 8 分钟。 2 、冷却时切不可摇动血糖管，以免还原的氧化亚铜被 空气中的氧再氧化，降低实际结果。 3 、加入磷钼酸后迅速比色。 4 、分光光度计的使用。 五、结果计算 测定管吸收度 标准管吸收度 葡萄糖 （ mg/100ml ） × 0.1 × 100 0.1 六、分析讨论 = 1 、分光光度计的原理 ? 分光光度计是根据物质对光的选择性吸收来 测量微量物质浓度的仪器，