抗体ProteinA纯化方法.docxVIP

抗体 ProteinA 纯化 一． ProteinA 柱子的制备 配制溶液； 结合／洗涤缓冲液： NaCl， 0.5M ； Na2HPO4 ， 20mM ； PH8.0。 配制 500ml 的方法： 称取 NaCl 4.383g ， Na2 HPO4 3.5814g 溶解于 450ml 的双蒸水中。调节 蒸水至总体积 500ml。  PH为  8.0,  补加双 制备空柱子 （1）先打开用过的 PD-10 上盖，拿掉上面的盖膜。盖上盖子，摇晃，倒去里面的填料，用PBS清洗 3 次。 （2）用胶带固定好 PD-10 空柱子，要求垂直放置。 （3）在 PD-10 空柱子里加入 2ml 的 Binding Wash buffer. （4） ProteinA 填料混匀，（ 10ml 包装一小瓶）。 （5）加入 5ml 的 ProteinA 到柱子中。 （6）  结合缓冲液。 （7） （8） 二．纯化步骤 样品准备；将兔血清与结合缓冲液1： 1 混合，过滤（防止堵塞柱子） 。 2. 平衡柱子：用 5-10 倍体积的结合缓冲液过 Protein A 柱。 上样：将准备好的血清样品上样，根据柱子的结合能力考虑上样量的体积。 洗脱杂蛋白：用结合缓冲液冲洗柱子，直至结合液中不含蛋白。 5.  收集抗体：用洗脱液过柱，同时收集漏出液（约 3-4ml/ 管），直至漏出液中不含蛋