基因工程综合实验教学大纲.docx

基因工程综合实验》教学大纲 适用专业：生物技术，生物工程 适用专业：生物技术，生物工程 大纲审定人：郑成超 学时： 54 学时 学分： 实验个数： 7 个 大纲执笔人：朱常香 3 学分 课程性质：必修 一、实验课的性质与任务 本课程是一门专业实验课。 该课程以植物基因工程的研究程序为 主线，综合了目的基因的分离、克隆，载体的构建，目的基因转化、 转基因植株的鉴定等方面的实验内容， 在注重专业性和可操作性的前 提下突出先进性和系统性， 加强教学内容的选择性。 通过本课程的学 习和实践，使学生对基因工程的全过程有系统、明确的认识，达到熟 识、理解并掌握基因工程的实验原理和操作方法， 提高分析问题和解 决问题的能力， 开拓创新能力， 为从事生物技术及其相关领域的科学 研究工作打下基础。 二、实验的目的与要求 本课程的目的是培养高年级本科生及研究生进行基因操作的能 力。教学中，要求调动教学双方的主观能动性，组织学生参加实验准 备，让学生和教师共同讨论理论和实验问题， 指导学生分析总结实验 结果，学会正确书写科学报告（论文） 。 三、实验项目及内容提要 基因工程综合实验( ) 序 号 实验名称 学时 必开 选开 实验类型 内容提要 验 证 基本 操作 综 合 设 计 1 基因克隆及载 体构建 10 V V RT-PCR技术克隆 PVY-CP基因，限 制性内切酶酶切 后，在T4 DNA连 接那的作用，将克 隆的CP基因构建 于克隆载体pUC19 中。 2 质粒DNA提取 及向细菌转化 8 V V 制备大肠杆菌DH5 感受态细胞，用热 击法将质粒 DNA 转入大肠杆菌中， 筛选阳性克隆，并 用煮沸法小量提取 质粒DNA，酶切 后，电泳验证。 3 农杆菌介导的 烟草基因转化 12 V V 用包含有表达载体 (pROKII-CP )农 杆菌LBA4404，采 用叶圆片法转化烟 草，经选择培养， 获得转基因植株。 4 基因枪介导的 水稻基因转化 8 V V 以报道基因 gusA 基因为外源基因， 采用PIG基因枪转 化稻幼胚或愈伤组 织，检测基因的瞬  时表达率。 5 植物总DNA提 取及PCR检测 12 V V 采用改进的SDS法 提取转基因烟草总 DNA ,并采用PCR 技术进行分子检测 6 植物总RNA提 取 4 V V 采用异硫氢酸胍法 提取烟草叶片总 RNA，并用甲醛凝 胶变性电泳检测提 取的RNA的质量 和产量。 7 酶联免疫吸附 技术检测基因 表达产物（病 毒） 8 V V 采用间接酶联免疫 吸附技术，对转基 因植株中病毒含量 进行检测，检测转 基因植株的抗病性 四、 实验报告的格式 实验报告的撰写要求使用专用实验报告纸。 实验报告的内容应包 括：实验目的，实验的基本原理，实验用的仪器设备及试剂，实验操 作程序，实验结果，实验应注意事项。 五、 本课程考核方式、方法及实验成绩评定方法 考核可采取闭卷、开卷、课程论文等形式，或多种形式相结合， 对学生的学习情况做出全面科学的评价。 成绩评定把学生的实际动手能力放在重要地位。根据考试情况、 实验报告撰写情况及平时表现给予综合评定。 六、实验应配套的主要仪器设备及台（套）数 仪器设备名称 台（套）数 电泳仪 2  电泳槽 2 旋涡混合器 6 恒温光照培养箱 1 全温震荡培养箱 1 磁力搅拌器 6 液氮罐 1 pH计 1 冰箱 1 超低温冰柜 1 分光光度计 1 万分之天平 1 百分之天平 1 低温咼速冷冻离心机 1 普通离心机 2 超静工作台 2 微量移液器 10 (1000ul\200ul\20ul) PCR仪 1 微波炉 1 水浴锅 1 恒温水浴锅 1 基因枪 1 制冰机 1 咼压灭菌锅 1 酶标仪 1 附：教学参考书目 1、 使用实验指导 《基因工程综合实验》操作手册。温孚江，朱常香，宋云枝等， 2003。 2、 参考书目 （1） 《分子克隆实验指南》（第三版）。J ?萨姆布鲁克，D W ?拉塞 尔著，黄培堂等译。科学出版社，2002。 （2） 《基因工程原理与技术》。王关林，方宏筠主编，科学出版 社，1998。